Nature.com වෙත පිවිසීම ගැන ඔබට ස්තුතියි.ඔබ භාවිතා කරන බ්‍රවුසර අනුවාදයට සීමිත CSS සහය ඇත.හොඳම අත්දැකීම සඳහා, ඔබ යාවත්කාලීන කළ බ්‍රවුසරයක් භාවිතා කරන ලෙස අපි නිර්දේශ කරමු (නැතහොත් Internet Explorer හි අනුකූලතා ප්‍රකාරය අක්‍රිය කරන්න).මේ අතරතුර, අඛණ්ඩ සහාය සහතික කිරීම සඳහා, අපි විලාසිතා සහ JavaScript නොමැතිව වෙබ් අඩවිය ලබා දෙන්නෙමු.
ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි යනු අන්තර් සෛලීය ප්‍රොටෝසෝවා පරපෝෂිතයෙකු වන අතර එය ආසාදිත ධාරකයාගේ ක්ෂුද්‍ර පරිසරය මොඩියුලේට් කරන අතර එය මොළයේ ගෙඩි වර්ධනයේ සිදුවීම් සමඟ සම්බන්ධ වේ.මෙම අධ්‍යයනයේ දී, ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනයෙන් පිටවන miRNA-21 මොළයේ ගෙඩි වර්ධනය ප්‍රවර්ධනය කරන බව අපි උපකල්පනය කරමු.Toxoplasma-ආසාදිත BV2 microglia වලින් Exosomes සංලක්ෂිත වූ අතර U87 glioma සෛල අභ්‍යන්තරකරණය තහවුරු කරන ලදී.Exosomal microRNA ප්‍රකාශන පැතිකඩයන් Toxoplasma gondii සහ tumor sorting හා සම්බන්ධ microRNA සහ microRNA-21A-5p අරා භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.එක්සෝසෝමවල miR-21 මට්ටම් වෙනස් කිරීම සහ මානව U87 ග්ලියෝමා සෛල ප්‍රගුණනය කෙරෙහි එක්සෝසෝමවල බලපෑම වෙනස් කිරීම මගින් U87 ග්ලියෝමා සෛලවල පිළිකා ආශ්‍රිත ජානවල mRNA මට්ටම් ද අපි විමර්ශනය කළෙමු.Toxoplasma gondii ආසාදනය වූ U87 glioma සෛලවල exosomes වලදී, microRNA-21 හි ප්‍රකාශනය වැඩි වන අතර ප්‍රති-ටියුමර් ජානවල ක්‍රියාකාරිත්වය (FoxO1, PTEN සහ PDCD4) අඩු වේ.ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න එක්සෝසෝම U87 ග්ලියෝමා සෛල ප්‍රගුණනය කරයි.Exosomes මූසික ගෙඩියක් ආකෘතියක U87 සෛල වර්ධනයට හේතු වේ.Toxoplasma-ආසාදිත BV2 microglia හි exosomal miR-21 වැඩි වීම U87 glioma සෛලවල සෛල වර්ධන ප්‍රවර්ධකයෙකු ලෙස ප්‍රතිටිටූමර් ජාන අඩු කිරීමෙන් වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කළ හැකි බව අපි යෝජනා කරමු.
2018 දී ලොව පුරා දියුණු පිළිකා රෝගීන් මිලියන 18.1 කට වඩා වැඩි ප්‍රමාණයක් හඳුනාගෙන ඇති බව ගණන් බලා ඇති අතර, සෑම වසරකම මධ්‍යම ස්නායු පද්ධතියේ පිළිකා 297,000 ක් පමණ හඳුනාගෙන ඇත (සියලු පිළිකා වලින් 1.6%)1.මිනිස් මොළයේ පිළිකා වර්ධනය සඳහා අවදානම් සාධක විවිධ රසායනික නිෂ්පාදන, පවුල් ඉතිහාසය සහ හිස චිකිත්සක සහ රෝග විනිශ්චය උපකරණ වලින් අයනීකරණ විකිරණ ඇතුළත් බව පෙර පර්යේෂණ මගින් පෙන්වා දී ඇත.කෙසේ වෙතත්, මෙම පිළිකා ඇතිවීමට නිශ්චිත හේතුව නොදනී.ලොව පුරා ඇති සියලුම පිළිකාවලින් ආසන්න වශයෙන් 20% ක්ම වෛරස්, බැක්ටීරියා සහ පරපෝෂිතයන් ඇතුළු බෝවන කාරක මගින් ඇති කරයි3,4.ආසාදිත රෝග කාරක DNA අලුත්වැඩියාව සහ සෛල චක්‍රය වැනි ධාරක සෛලයේ ප්‍රවේණි යාන්ත්‍රණය කඩාකප්පල් කරන අතර නිදන්ගත දැවිල්ලට හා ප්‍රතිශක්තිකරණ පද්ධතියට හානි වීමට හේතු විය හැක5.
මානව පැපිලෝමා වයිරස් සහ හෙපටයිටිස් බී සහ සී වෛරස් ඇතුළුව වඩාත් සුලභ වෛරස් රෝග කාරක වන්නේ මානව පිළිකා හා සම්බන්ධ බෝවන කාරක වේ.පරපෝෂිතයන්ට මිනිස් පිළිකා වර්ධනය කිරීමේ විභව භූමිකාවක් ද ඉටු කළ හැකිය.Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis සහ Hymenolepis nana යන පරපෝෂිත විශේෂ කිහිපයක්, විවිධ වර්ගයේ මානව පිළිකා 6,7,8 සඳහා සම්බන්ධ වී ඇත.
Toxoplasma gondii යනු ආසාදිත ධාරක සෛලවල ක්ෂුද්‍ර පරිසරය නියාමනය කරන අන්තර් සෛලීය ප්‍රොටෝසෝවායකි.මෙම පරපෝෂිතයා ලෝක ජනගහනයෙන් ආසන්න වශයෙන් 30%කට ආසාදනය වන බවට ඇස්තමේන්තු කර ඇති අතර, සමස්ත ජනගහනය 9,10 අවදානමකට ලක් කරයි.Toxoplasma gondii මගින් මධ්‍යම ස්නායු පද්ධතිය (CNS) ඇතුළු අත්‍යවශ්‍ය ඉන්ද්‍රියයන් ආසාදනය කළ හැකි අතර මාරාන්තික මෙනින්ජයිටිස් සහ එන්සෙෆලයිටිස් වැනි බරපතල රෝග ඇති කරයි, විශේෂයෙන් ප්‍රතිශක්තිය අඩු රෝගීන්9.කෙසේ වෙතත්, ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි හට ප්‍රතිශක්තිකරණ හැකියාවක් නොමැති පුද්ගලයින්ගේ සෛල වර්ධනය සහ ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාර මොඩියුලේට් කිරීමෙන් ආසාදිත ධාරකයාගේ පරිසරය වෙනස් කළ හැකි අතර, එය රෝග ලක්ෂණ රහිත නිදන්ගත ආසාදනයක් පවත්වා ගැනීමට මග පාදයි.සිත්ගන්නා කරුණ නම්, T. gondii ව්‍යාප්තිය සහ මොළයේ ගෙඩි ඇතිවීම අතර සහසම්බන්ධතාවය සැලකිල්ලට ගෙන, සමහර වාර්තා යෝජනා කරන්නේ නිදන්ගත T. gondii ආසාදනය හේතුවෙන් vivo සත්කාරක පාරිසරික වෙනස්කම් පිළිකා ක්ෂුද්‍ර පරිසරයට සමාන බවයි.
අසල්වැසි සෛල වලින් ප්‍රෝටීන සහ න්‍යෂ්ටික අම්ල ඇතුළු ජීව විද්‍යාත්මක අන්තර්ගතයන් ලබා දෙන අන්තර් සෛලීය සන්නිවේදකයන් ලෙසින් Exosomes හැඳින්වේ16,17.පිළිකා ක්ෂුද්‍ර පරිසරයේ ඇති ප්‍රති-ඇපොප්ටෝසිස්, ඇන්ජියෝජෙනසිස් සහ මෙටාස්ටැසිස් වැනි පිළිකා ආශ්‍රිත ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන්ට එක්සෝසෝම බලපෑම් කළ හැකිය.විශේෂයෙන්ම, miRNAs (miRNAs), නියුක්ලියෝටයිඩ 22 ක් පමණ දිග කුඩා කේතීකරණය නොවන RNAs, miRNA-ප්‍රේරිත නිශ්ශබ්දතා සංකීර්ණය (miRISC) හරහා මිනිස් mRNA වලින් 30%කට වඩා පාලනය කරන වැදගත් පශ්චාත් පිටපත් කිරීමේ ජාන නියාමකයින් වේ.Toxoplasma gondii ආසාදිත ධාරකවල miRNA ප්‍රකාශනය පාලනය කිරීමෙන් ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් කඩාකප්පල් කළ හැකිය.ධාරක miRNA වල පරපෝෂිතයාගේ පැවැත්මේ උපාය මාර්ගය සාක්ෂාත් කර ගැනීම සඳහා ධාරක ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් නියාමනය කිරීම සඳහා වැදගත් සංඥා අඩංගු වේ.මේ අනුව, T. gondii ආසාදනය වීම මත ධාරක miRNA පැතිකඩෙහි වෙනස්කම් අධ්‍යයනය කිරීමෙන් ධාරකය සහ T. gondii අතර අන්තර්ක්‍රියා වඩාත් පැහැදිලිව තේරුම් ගැනීමට අපට උපකාර කළ හැක.ඇත්ත වශයෙන්ම, තිරුඥානම් සහ අල්.15 T. gondii පිළිකා වර්ධනයට සම්බන්ධ විශේෂිත ධාරක miRNA මත එහි ප්‍රකාශනය වෙනස් කිරීමෙන් මොළයේ පිළිකා කාරකය ප්‍රවර්ධනය කරන බව යෝජනා කළ අතර T. gondii පර්යේෂණාත්මක සතුන් තුළ ග්ලියෝමා ඇති කළ හැකි බව සොයා ගන්නා ලදී.
මෙම අධ්‍යයනය මගින් Toxoplasma BV2 ආසාදිත ධාරක මයික්‍රොග්ලියා හි එක්සෝසෝමල් miR-21 වෙනස් කිරීම කෙරෙහි අවධානය යොමු කරයි.FoxO1/p27 හි න්‍යෂ්ටිය තුළ රඳවා තබා ගැනීම හේතුවෙන් U87 ග්ලියෝමා සෛල වර්ධනයේදී වෙනස් වූ exosomal miR-21 හි විය හැකි කාර්යභාරයක් අපි නිරීක්ෂණය කළෙමු, එය අධික ලෙස පීඩනයට ලක් වූ miR-21 හි ඉලක්කය වේ.
BV2 වෙතින් ලබාගත් Exosomes අවකල්‍ය කේන්ද්‍රාපසාරී භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලද අතර සෛලීය සංරචක හෝ වෙනත් vesicles සමඟ දූෂණය වීම වැළැක්වීම සඳහා විවිධ ක්‍රම මගින් වලංගු කරන ලදී.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) BV2 සෛල සහ exosomes වලින් නිස්සාරණය කරන ලද ප්‍රෝටීන අතර වෙනස් රටා පෙන්වයි (රූපය 1A), සහ Alix වල පැවැත්ම සඳහා සාම්පල තක්සේරු කරන ලද අතර, බටහිරින් exosomal ප්‍රෝටීන් සලකුණු ඉවත් කිරීම මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.ඇලික්ස් ලේබල් කිරීම එක්සෝසෝම් ප්‍රෝටීන වල ඇති නමුත් BV2 සෛල ලයිසේට් ප්‍රෝටීන වල දක්නට නොලැබේ (රූපය 1B).මීට අමතරව, BV2 වෙතින් ලබාගත් exosomes වලින් පිරිසිදු කරන ලද RNA ජෛව විශ්ලේෂකයක් භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.18S සහ 28S ribosomal උප ඒකක ඉතා කලාතුරකින් නිරීක්ෂණය කරන ලද exosomal RNA සංක්‍රමණ රටාව, විශ්වසනීය සංශුද්ධතාවය පෙන්නුම් කරයි (Figure 1C).අවසාන වශයෙන්, සම්ප්‍රේෂණ ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂය මගින් පෙන්නුම් කළේ නිරීක්ෂණය කරන ලද එක්සෝසෝම 60-150 nm පමණ ප්‍රමාණයෙන් යුක්ත වන අතර exosome morphology ට ආවේණික කුසලාන වැනි ව්‍යුහයක් ඇති බවයි (රූපය 1D).
BV2 සෛල වලින් ව්‍යුත්පන්න වූ exosomes වල ලක්ෂණ.(A) ආරක්ෂිත දත්ත පත්‍රිකා පිටුව.ප්‍රෝටීන් BV2 සෛලවලින් හෝ BV2 වලින් ලබාගත් එක්සෝසෝමවලින් හුදකලා විය.සෛල සහ එක්සෝසෝම අතර ප්‍රෝටීන් රටා වෙනස් වේ.(B) exosomal සලකුණක (Alix) වෙස්ටර්න් බ්ලොට් විශ්ලේෂණය.(C) ජෛව විශ්ලේෂකයක් භාවිතයෙන් BV2 සෛල සහ BV2 ව්‍යුත්පන්න exosomes වලින් පිරිසිදු RNA ඇගයීම.මේ අනුව, BV2 සෛලවල 18S සහ 28S ribosomal උප ඒකක exosomal RNA හි දක්නට ලැබුණේ කලාතුරකිනි.(D) සම්ප්‍රේෂණ ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂයෙන් පෙන්නුම් කළේ BV2 සෛල වලින් හුදකලා වූ exosomes 2% යුරේනයිල් ඇසිටේට් සමඟ සෘණාත්මකව පැල්ලම් වී ඇති බවයි.Exosomes ප්‍රමාණයෙන් 60-150 nm පමණ වන අතර කුසලාන හැඩැති (ගීතය සහ ජුං, ප්‍රකාශනය නොකළ දත්ත).
BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes U87 මානව ග්ලියෝමා සෛල තුළට සෛල අභ්‍යන්තරකරණය confocal අන්වීක්ෂය භාවිතයෙන් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.PKH26 ලේබල් කරන ලද එක්සෝසෝම U87 සෛලවල සයිටොප්ලාස්මයේ ස්ථානගත කර ඇත.න්‍යෂ්ටික DAPI (Fig. 2A) සමඟ පැල්ලම් කර ඇත, BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes ධාරක සෛල මගින් අභ්‍යන්තරීකරණය කළ හැකි අතර ග්‍රාහක සෛල පරිසරයට බලපෑම් කළ හැකි බව පෙන්නුම් කරයි.
BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes U87 glioma සෛල සහ BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes වලට Toxoplasma RH මගින් ආසාදනය වූ U87 ග්ලියෝමා සෛලවල ව්‍යාප්තිය ඇති කරයි.(A) confocal අන්වීක්ෂය මගින් මනිනු ලබන U87 සෛල මගින් ගිලී ඇති Exosomes.U87 ග්ලියෝමා සෛල PKH26 (රතු) ලෙස ලේබල් කරන ලද එක්සෝසෝම හෝ පැය 24ක් පාලනයකින් තොරව ඉන්කියුබේෂන් කර ඇත.න්යෂ්ටීන් DAPI (නිල්) වලින් වර්ණාලේප කර ඇති අතර පසුව confocal අන්වීක්ෂයක් යටතේ නිරීක්ෂණය කරන ලදී (පරිමාණ තීරුව: 10 μm, x 3000).(B) U87 ග්ලියෝමා සෛල ප්‍රගුණනය සෛල ප්‍රගුණන විශ්ලේෂණය මගින් තීරණය කරන ලදී.U87 glioma සෛල සඳහන් කරන ලද කාලය සඳහා exosomes සමඟ ප්රතිකාර කරන ලදී. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ ටී-පරීක්ෂණයෙන්. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ t-test භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලදී.
BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes U87 glioma සෛල තුළට අභ්‍යන්තරීකරණය කිරීම තහවුරු කිරීමෙන් පසුව, මානව ග්ලියෝමා සෛල වර්ධනය කිරීමේදී BV2-ව්‍යුත්පන්න Toxoplasma-ව්‍යුත්පන්න exosomes වල කාර්යභාරය විමර්ශනය කිරීම සඳහා අපි සෛල ප්‍රගුණන පරීක්ෂණ සිදු කළෙමු.T. gondii-ආසාදිත BV2 සෛල වලින් exosomes සමඟ U87 සෛල ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් පෙන්නුම් කළේ T. gondii-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes මගින් පාලනයට සාපේක්ෂව U87 සෛලවල සැලකිය යුතු ඉහළ පැතිරීමක් ඇති කළ බවයි (රූපය 2B).
මීට අමතරව, ටොක්සොප්ලාස්මා උත්තේජක එක්සෝසෝම මගින් ඉහළම ප්‍රගුණනය (දත්ත පෙන්වා නැත) නිසා U118 සෛල වර්ධනයට U87 හා සමාන ප්‍රතිඵල ලැබිණි.මෙම දත්ත මත පදනම්ව, අපට BV2-ව්‍යුත්පන්න ටොක්සොප්ලාස්මා-ආසාදිත එක්සෝසෝම් ග්ලියෝමා සෛල ප්‍රගුණනයෙහි වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කරන බව දැක්විය හැකිය.
ටොක්සොප්ලාස්මා-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න එක්සෝසෝමවල පිළිකා වර්ධනයට ඇති බලපෑම විමර්ශනය කිරීම සඳහා, අපි Xenograft ආකෘතියක් සඳහා U87 glioma සෛල නිරුවත් මීයන් තුළට එන්නත් කර BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes හෝ RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes එන්නත් කළෙමු.සති 1 කට පසු ගෙඩි පෙනෙන්නට පටන් ගත් පසු, එකම ආරම්භක ස්ථානය තීරණය කිරීම සඳහා මීයන් 5 දෙනෙකුගෙන් යුත් සෑම පර්යේෂණ කණ්ඩායමක්ම ගෙඩියේ ප්‍රමාණය අනුව බෙදා ඇති අතර, ගෙඩියේ ප්‍රමාණය දින 22 ක් සඳහා මනිනු ලැබේ.
U87 xenograft ආකෘතිය සහිත මීයන් තුළ, BV2-ව්යුත්පන්න RH-ආසාදිත exosome කාණ්ඩයේ 22 වන දින (රූපය 3A,B) සැලකිය යුතු ලෙස විශාල ගෙඩියක ප්රමාණය සහ බර නිරීක්ෂණය කරන ලදී.අනෙක් අතට, BV2-ව්‍යුත්පන්න exosome කාණ්ඩය සහ exosome ප්‍රතිකාරයෙන් පසු පාලන කණ්ඩායම අතර ගෙඩියේ ප්‍රමාණයේ සැලකිය යුතු වෙනසක් නොතිබුණි.මීට අමතරව, ග්ලියෝමා සෛල සහ එක්සෝසෝම සමඟ එන්නත් කරන ලද මීයන් RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes කාණ්ඩයේ විශාලතම පිළිකා පරිමාව දෘශ්‍ය ලෙස පෙන්වයි (රූපය 3C).මෙම ප්‍රතිඵල පෙන්නුම් කරන්නේ BV2-ව්‍යුත්පන්න ටොක්සොප්ලාස්මා-ආසාදිත එක්සෝසෝම මූසික පිළිකා ආකෘතියක ග්ලියෝමා වර්ධනයට හේතු වන බවයි.
U87 xenograft mouse ආකෘතියක BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes වල Oncogenesis (AC).BV2 වෙතින් ලබාගත් RH-ආසාදිත exosomes සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද BALB/c නිරුවත් මීයන් තුළ ගෙඩියේ ප්‍රමාණය (A) සහ බර (B) සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය.BALB/c නිරුවත් මීයන් (C) Matrigel මිශ්‍රණයේ අත්හිටුවන ලද 1 x 107 U87 සෛල සමඟ චර්මාභ්යන්තරව එන්නත් කරන ලදී.එන්නත් කිරීමෙන් දින හයකට පසු, BV2-ව්යුත්පන්න exosomes 100 μg මීයන් තුළ ප්රතිකාර කරන ලදී.ගෙඩියේ ප්‍රමාණය සහ බර පිළිවෙළින් සඳහන් කරන ලද දින සහ පූජාවෙන් පසු මනිනු ලැබේ. *P <0.05. *P <0.05. *R <0,05. *P <0.05. *P <0.05. *P <0.05. *R <0,05. *P <0.05.
දත්ත පෙන්නුම් කළේ ටොක්සොප්ලාස්මා ආර්එච් වික්‍රියාව (රූපය 4A) ආසාදනය වීමෙන් පසු ප්‍රතිශක්තිය හෝ පිළිකා වර්ධනයට සම්බන්ධ miRNAs 37 (අධික ලෙස ප්‍රකාශ කරන ලද සහ 21 පහළට) සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් වී ඇති බවයි.වෙනස් කරන ලද miRNA අතර miR-21 හි සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම් තත්‍ය කාලීන RT-PCR මගින් BV2 වෙතින් ලබාගත් exosomes, BV2 සහ U87 සෛල සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද exosomes මගින් තහවුරු කරන ලදී.miR-21 හි ප්‍රකාශනය ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි (RH වික්‍රියා) ආසාදනය වූ BV2 සෛල වලින් exosomes හි සැලකිය යුතු වැඩි වීමක් පෙන්නුම් කරයි (රූපය 4B).BV2 සහ U87 සෛලවල miR-21 හි සාපේක්ෂ ප්‍රකාශන මට්ටම් වෙනස් කරන ලද exosomes ලබා ගැනීමෙන් පසු වැඩි විය (රූපය 4B).ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි (ME49 වික්‍රියා) ආසාදනය වූ පිළිකා රෝගීන්ගේ සහ මීයන්ගේ මොළයේ පටකවල miR-21 ප්‍රකාශනයේ සාපේක්ෂ මට්ටම් පිළිවෙලින් පාලනයන්ට වඩා වැඩි විය (රූපය 4C).මෙම ප්‍රතිඵල vitro සහ vivo තුළ පුරෝකථනය කරන ලද සහ තහවුරු කරන ලද microRNA වල ප්‍රකාශන මට්ටම් අතර වෙනස්කම් සමඟ සහසම්බන්ධ වේ.
ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි (RH) ආසාදනය වූ මයික්‍රොග්ලියා හි එක්සෝසෝමල් miP-21a-5p ප්‍රකාශනයේ වෙනස්වීම්.(A) T. gondii RH ආසාදනයෙන් පසු ප්‍රතිශක්තිය හෝ පිළිකා වර්ධනය හා සම්බන්ධ siRNA හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් පෙන්නුම් කරයි.(B) සාපේක්ෂ miR-21 ප්‍රකාශන මට්ටම් BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes, BV2-ප්‍රතිකාර කළ exosomes සහ U87 සෛලවල තත්‍ය කාලීන RT-PCR මගින් අනාවරණය කර ගන්නා ලදී.(C) පිළිකා රෝගීන්ගේ (N=3) සහ ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි (ME49 වික්‍රියාව) ආසාදිත මීයන්ගේ මොළයේ පටකවල සාපේක්ෂ miR-21 ප්‍රකාශන මට්ටම් (N=3) හමු විය. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ t-test භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ t-test භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලදී.
RH-ආසාදිත BV2 සෛල වලින් Exosomes vivo සහ in vitro හි gliomas වර්ධනයට හේතු විය (රූපය 2, 3).අදාළ mRNA හඳුනා ගැනීම සඳහා, අපි BV2 හෝ RH BV2 වලින් ලබාගත් exosomes ආසාදනය වූ U87 සෛලවල ප්‍රතිටියුමර් ඉලක්ක ජානවල mRNA මට්ටම්, forkhead box O1 (FoxO1), PTEN, සහ වැඩසටහන්ගත සෛල මරණය 4 (PDCD4) පරීක්ෂා කළෙමු.ජෛව තොරතුරු විශ්ලේෂණය මගින් පෙන්වා දී ඇත්තේ FoxO1, PTEN සහ PDCD4 ජාන ඇතුළු පිළිකා ආශ්‍රිත ජාන කිහිපයකට miR-2121,22 බන්ධන ස්ථාන ඇති බවයි.BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes (Fig. 5A) හා සසඳන විට RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න එක්සෝසෝමවල ප්‍රතිටියුමර් ඉලක්ක ජානවල mRNA මට්ටම් අඩු විය.BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes හා සසඳන විට FoxO1 RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes හි අඩු ප්‍රෝටීන් මට්ටම් පෙන්නුම් කළේය (Figure 5B).මෙම ප්‍රතිඵල මත පදනම්ව, RH-ආසාදිත BV2 වලින් ලබාගත් එක්සෝසෝම පිළිකා වර්ධනයේ දී ඔවුන්ගේ භූමිකාව පවත්වා ගනිමින් ප්‍රති-ඔන්කොජනික් ජාන අඩු කරන බව අපට තහවුරු කළ හැකිය.
Toxoplasma RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes, Toxoplasma RH-ආසාදිත BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes මගින් U87 glioma සෛල තුළ antitumor ජාන මර්දනය කරයි.(A) PBS exosomes හා සසඳන විට T. gondii RH-ආසාදිත BV2 වෙතින් ව්‍යුත්පන්න වූ exosomes හි FoxO1, PTEN සහ PDCD4 ප්‍රකාශනයේ තත්‍ය කාලීන PCR.β-actin mRNA පාලනයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.(B) FoxO1 ප්‍රකාශනය බටහිර blotting මගින් තීරණය කරන ලද අතර ImageJ වැඩසටහන භාවිතයෙන් densitometry දත්ත සංඛ්‍යානමය වශයෙන් ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0.05 ශිෂ්‍ය ටී පරීක්ෂණයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ t-test භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලදී. *P <0.05 通过学生t 检验获得。 *P <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ශිෂ්‍යයාගේ t-test භාවිතයෙන් ලබා ගන්නා ලදී.
පිළිකා ආශ්‍රිත ජාන නියාමනය මත exosomes වල miP-21 බලපෑම අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා Lipofectamine 2000 භාවිතයෙන් U87 සෛල miP-21 නිෂේධකයක් සමඟ මාරු කරන ලද අතර සෛල මාරු කිරීමෙන් පැය 24 කට පසුව අස්වනු නෙළන ලදී.miR-21 inhibitors සමඟ මාරු කරන ලද සෛලවල FoxO1 සහ p27 ප්‍රකාශන මට්ටම් qRT-PCR භාවිතයෙන් BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද සෛල සමඟ සංසන්දනය කරන ලදී (රූපය 6A,B).miR-21 inhibitor U87 සෛල තුළට මාරු කිරීම FoxO1 සහ p27 ප්‍රකාශනය සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කරන ලදී (FIG. 6).
RH-ආසාදිත exosomal BV2-ව්යුත්පන්න miP-21 U87 glioma සෛල තුළ FoxO1/p27 ප්රකාශනය වෙනස් කරන ලදී.U87 සෛල Lipofectamine 2000 භාවිතයෙන් miP-21 inhibitor සමඟ මාරු කරන ලද අතර මාරු කිරීමෙන් පැය 24 කට පසුව සෛල අස්වනු නෙළන ලදී.miR-21 inhibitors සමඟ මාරු කරන ලද සෛලවල FoxO1 සහ p27 ප්‍රකාශන මට්ටම් qRT-PCR (A, B) භාවිතයෙන් BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද සෛලවල මට්ටම් සමඟ සංසන්දනය කරන ලදී.
ධාරකයාගේ ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාරයෙන් ගැලවීමට, ටොක්සොප්ලාස්මා පරපෝෂිතයා පටක ගෙඩියක් බවට පරිවර්තනය වේ.ඔවුන් ධාරකයාගේ ජීවිත කාලය පුරාම මොළය, හදවත සහ අස්ථි මාංශ පේශි ඇතුළු විවිධ පටක පරපෝෂිත කරන අතර ධාරකයාගේ ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාරය මොඩියුලේට් කරයි.ඊට අමතරව, ධාරක සෛලවල සෛල චක්‍රය සහ ඇපොප්ටෝසිස් නියාමනය කළ හැකි අතර, ඒවායේ ප්‍රගුණනය ප්‍රවර්ධනය කරයි14,24.ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි ප්‍රධාන වශයෙන් ධාරක ඩෙන්ඩ්‍රිටික් සෛල, නියුට්‍රොෆිල්ස් සහ මොළයේ ක්ෂුද්‍ර ග්‍ලියා ඇතුළු මොනොසයිට්/මැක්‍රෝෆේජ් පෙළපත ආසාදනය කරයි.ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි M2 ෆීනෝටයිප් වල මැක්‍රෝෆේජ්වල විභේදනය ඇති කරයි, රෝග කාරක ආසාදනයෙන් පසු තුවාල සුව කිරීමට බලපායි, සහ අධි රුධිර වාහිනීකරණය සහ කැටිති ෆයිබ්‍රෝසිස් සමඟ ද සම්බන්ධ වේ.ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනයේ මෙම චර්යාත්මක ව්‍යාධිජනකය පිළිකා වර්ධනයට සම්බන්ධ සලකුණු වලට සම්බන්ධ විය හැකිය.Toxoplasma මගින් නියාමනය කරනු ලබන සතුරු පරිසරය අනුරූප පූර්ව පිළිකාවට සමාන විය හැක.එබැවින්, ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනය මොළයේ පිළිකා වර්ධනයට දායක විය යුතු බව උපකල්පනය කළ හැකිය.ඇත්ත වශයෙන්ම, විවිධ මොළයේ පිළිකා ඇති රෝගීන්ගේ සෙරුමය තුළ ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනයේ ඉහළ අනුපාත වාර්තා වී ඇත.මීට අමතරව, ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි තවත් පිළිකා කාරකයක් විය හැකි අතර අනෙකුත් බෝවන පිළිකා කාරකයන්ට මොළයේ ගෙඩි වර්ධනය කිරීමට උපකාර කිරීම සඳහා සහජීවනයෙන් ක්‍රියා කරයි.මේ සම්බන්ධයෙන්, P. falciparum සහ Epstein-Barr වෛරසය Burkitt's lymphoma ගොඩනැගීමට synergistically දායක වන බව සඳහන් කිරීම වටී.
පිළිකා පර්යේෂණ ක්ෂේත්‍රයේ නියාමකයින් ලෙස එක්සෝසෝම් වල කාර්යභාරය පුළුල් ලෙස විමර්ශනය කර ඇත.කෙසේ වෙතත්, පරපෝෂිතයන් සහ ආසාදිත ධාරක අතර එක්සෝසෝම වල කාර්යභාරය දුර්වල ලෙස වටහාගෙන ඇත.මේ වන විට, ස්‍රාවය කරන ප්‍රෝටීන ඇතුළු විවිධ නියාමකයින්, ප්‍රොටෝසෝවා පරපෝෂිතයන් ධාරක ප්‍රහාරයට ප්‍රතිරෝධය දක්වන සහ ආසාදනය පවත්වා ගෙන යන ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් පැහැදිලි කර ඇත.ප්‍රොටෝසෝවා ආශ්‍රිත ක්ෂුද්‍ර වේදිකා සහ ඒවායේ ක්ෂුද්‍ර ආර්එන්ඒ ධාරක සෛල සමඟ අන්තර් ක්‍රියා කරමින් ඒවායේ පැවැත්ම සඳහා හිතකර පරිසරයක් නිර්මාණය කරන බවට මෑතක සිට වර්ධනය වන සංකල්පයක් පවතී.එබැවින්, වෙනස් කරන ලද exosomal miRNAs සහ glioma සෛල ප්‍රගුණනය අතර සම්බන්ධය සොයා ගැනීමට වැඩිදුර අධ්‍යයනයන් අවශ්‍ය වේ.මයික්‍රොආර්එන්ඒ වෙනස් කිරීම (පොකුරු ජාන miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 සහ miR-17-92) ටොක්සොප්ලාස්මා-ආසාදිත මානව මැක්‍රෝෆේජ්වල STAT3 ප්‍රවර්ධකයා සමඟ බැඳී, නියාමනය කර ප්‍රේරණය කරයි. ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි ආසාදනයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් ඇපොප්ටෝසිස් 29 .ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනය miR-17-5p සහ miR-106b-5p වල ප්‍රකාශනය වැඩි කරයි, ඒවා අධි ප්‍රොලිෆෙරේටිව් රෝග කිහිපයක් සමඟ සම්බන්ධ වේ 30 .මෙම දත්ත යෝජනා කරන්නේ Toxoplasma ආසාදනය මගින් නියාමනය කරන ලද ධාරක miRNA පරපෝෂිත පැවැත්ම සහ ධාරක ජීව විද්‍යාත්මක හැසිරීම් වල ව්‍යාධිජනක සඳහා වැදගත් අණු බවයි.
වෙනස් කරන ලද miRNAs gliomas ඇතුළුව මාරාන්තික සෛලවල ආරම්භය සහ ප්‍රගතිය අතරතුර විවිධ ආකාරයේ හැසිරීම් වලට බලපෑම් කළ හැකිය: වර්ධන සංඥා වල ස්වයංපෝෂිත බව, වර්ධනයට බාධා කරන සංඥා වලට අසංවේදී බව, apoptosis මගහැරීම, අසීමිත ප්‍රතිවර්තන විභවය, angiogenesis, ආක්‍රමණය සහ metastasis, සහ දැවිල්ල.ග්ලියෝමාහිදී, ප්‍රකාශන පැතිකඩ අධ්‍යයනයන් කිහිපයකදී වෙනස් කරන ලද miRNAs හඳුනාගෙන ඇත.
වර්තමාන අධ්‍යයනයේ දී, ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදිත ධාරක සෛලවල miRNA-21 ප්‍රකාශනය ඉහළ මට්ටමක පවතින බව අපි තහවුරු කළෙමු.miR-21 ග්ලියෝමාස්, 33 ඇතුළු ඝන පිළිකාවල නිතර නිතර අධික ලෙස පීඩනයට ලක්වන මයික්‍රොආර්එන්ඒ එකක් ලෙස හඳුනාගෙන ඇති අතර එහි ප්‍රකාශනය ග්ලියෝමා ශ්‍රේණිය සමඟ සහසම්බන්ධ වේ.සමුච්චිත සාක්ෂි වලින් පෙනී යන්නේ miR-21 යනු ග්ලියෝමා වර්ධනයේ ප්‍රති-ඇපොප්ටෝටික් සාධකයක් ලෙස ක්‍රියා කරන නව ඔන්කොජීන් වර්ගයක් වන අතර පටක සහ ප්ලාස්මා වල මිනිස් මොළයේ විකෘතිතාවල අධික ලෙස පීඩනයට ලක්ව ඇති බවයි.සිත්ගන්නා කරුණ නම්, ග්ලියෝමා සෛල සහ පටක වල miR-21 අක්‍රිය වීම කැස්පේස් මත යැපෙන ඇපොප්ටෝසිස් හේතුවෙන් සෛල ප්‍රගුණනය නිෂේධනය කරයි.miR-21 පුරෝකථනය කරන ලද ඉලක්කවල ජෛව තොරතුරු විශ්ලේෂණය මගින් miR-2121 බන්ධන අඩවිය සමඟ ක්‍රමලේඛනගත සෛල මරණය 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, සහ forkhead box O1 (FoxO1) ඇතුළු ඇපොප්ටෝසිස් මාර්ග හා සම්බන්ධ බහු පිළිකා මර්දන ජාන අනාවරණය විය..22.38.
FoxO1, පිටපත් කිරීමේ සාධකයක් ලෙස (FoxO), විවිධ වර්ගයේ මානව පිළිකා වර්ධනයට සම්බන්ධ වන අතර p21, p27, Bim, සහ FasL40 වැනි පිළිකා මර්දන ජානවල ප්‍රකාශනය නියාමනය කළ හැකිය.FoxO1 හට සෛල වර්ධනය මැඩපැවැත්වීම සඳහා p27 වැනි සෛල චක්‍ර නිෂේධක බැඳීමට සහ සක්‍රීය කිරීමට හැකිය.එපමනක් නොව, FoxO1 PI3K/Akt සංඥා කිරීමේ ප්‍රධාන ප්‍රයෝගිකයෙකු වන අතර p2742 පිටපත් කිරීම සක්‍රිය කිරීම හරහා සෛල චක්‍ර ප්‍රගතිය සහ සෛල අවකලනය වැනි බොහෝ ජීව විද්‍යාත්මක ක්‍රියාවලීන් නියාමනය කරයි.
අවසාන වශයෙන්, ටොක්සොප්ලාස්මා-ආසාදිත මයික්‍රොග්ලියාවෙන් ලබාගත් exosomal miR-21 ග්ලියෝමා සෛලවල වර්ධන නියාමකයෙකු ලෙස වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කළ හැකි බව අපි විශ්වාස කරමු (රූපය 7).කෙසේ වෙතත්, exosomal miR-21, වෙනස් කරන ලද Toxoplasma ආසාදනය සහ ග්ලියෝමා වර්ධනය අතර සෘජු සම්බන්ධයක් සොයා ගැනීමට වැඩිදුර අධ්‍යයනයන් අවශ්‍ය වේ.මෙම ප්‍රතිඵල ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනය සහ ග්ලියෝමා ඇතිවීම අතර සම්බන්ධය අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා ආරම්භක ලක්ෂ්‍යයක් සපයනු ඇතැයි අපේක්ෂා කෙරේ.
ග්ලියෝමා (මොළයේ) පිළිකා කාරක යාන්ත්‍රණය පිළිබඳ ක්‍රමානුරූප රූප සටහනක් මෙම අධ්‍යයනයේ දී යෝජනා කෙරේ.කතුවරයා PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) චිත්‍ර අඳියි.
සතුන් භාවිතා කිරීම ඇතුළුව මෙම අධ්‍යයනයේ සියලුම පර්යේෂණාත්මක ප්‍රොටෝකෝල සෝල් ජාතික විශ්ව විද්‍යාලයේ සත්ව ආරක්ෂණ සහ පරිශීලක කමිටුවේ සම්මත ආචාර ධර්ම මාර්ගෝපදේශවලට අනුකූල වූ අතර ඒවා සෝල් ජාතික විශ්වවිද්‍යාල වෛද්‍ය විද්‍යාලයේ ආයතනික සමාලෝචන මණ්ඩලය විසින් අනුමත කරන ලදී (IRB අංකය SNU- 150715).-2).සියලුම පරීක්ෂණ ක්‍රියා පටිපාටි ARRIVE නිර්දේශයන්ට අනුකූලව සිදු කරන ලදී.
BV2 mouse microglia සහ U87 human glioma සෛල Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) සහ Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), පිළිවෙලින් 10% fetal bovine serum, 4 mM අඩංගු වේ. glutamine, 0.2 mM පෙනිසිලින් සහ 0.05 mM streptomycin.37 ° C දී 5% CO2 සහිත ඉන්කියුබේටරයක සෛල වගා කරන ලදී.U87 සෛල සමඟ සංසන්දනය කිරීම සඳහා තවත් ග්ලියෝමා සෛල රේඛාවක්, U118 භාවිතා කරන ලදී.
T. gondii-ආසාදිත RH සහ ME49 වික්‍රියා වලින් exosomes හුදකලා කිරීම සඳහා, T. gondii tachyzoites (RH වික්‍රියා) සති 6ක් වයසැති BALB/c මීයන්ගේ උදර කුහරයෙන් දින 3-4කට පෙර එන්නත් කරන ලදී.Tachyzoites PBS සමඟ තුන් වරක් සෝදා 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43 හි කේන්ද්රාපසාරී කිරීම මගින් පිරිසිදු කරන ලදී.ME49 ප්‍රභේදයේ tachyzoites ලබා ගැනීම සඳහා, BALB/c මීයන්ට පටක ගෙඩි 20ක් සමඟ අභ්‍යන්තරව එන්නත් කරන ලද අතර, ආසාදනයෙන් පසු 6-8 වන දින උදර කුහරය සේදීම මගින් cysts තුළ tachyzoite පරිවර්තනය එකතු කරන ලදී (PI).මීයන් පීබීඑස් ආසාදනය වී ඇත.ME49 tachyzoites 100 μg/ml පෙනිසිලින් (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL) සහ 5% කලල ගව මස්තු (Lonza, Walkers) සමඟ පරිපූරණය කරන ලද සෛලවල වර්ධනය විය. .., USA) 37 °C සහ 5% කාබන් ඩයොක්සයිඩ්.Vero සෛලවල වගා කිරීමෙන් පසු, ME49 tachyzoites 25 ගේජ් ඉඳිකටුවක් හරහා දෙවරක් ලබා දී සුන්බුන් සහ සෛල ඉවත් කිරීම සඳහා 5 µm පෙරහනක් හරහා යවනු ලැබේ.සේදීමෙන් පසු, ටායිසොයිට් PBS44 හි නැවත සකස් කරන ලදී.ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි වික්‍රියා ME49 හි පටක ගෙඩි නඩත්තු කරන ලද්දේ ආසාදිත C57BL/6 මීයන්ගේ මොළයෙන් හුදකලා වූ ගෙඩිවලට අභ්‍යන්තර පෙරිටෝනියල් එන්නත් කිරීමෙනි (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).ME49-ආසාදිත මීයන්ගේ මොළය PI මාස 3 කට පසු අස්වනු නෙළන ලද අතර ගෙඩි හුදකලා කිරීම සඳහා අන්වීක්ෂයක් යටතේ අඹරන ලදී.ආසාදිත මීයන් සෝල් ජාතික විශ්වවිද්‍යාල වෛද්‍ය විද්‍යාලයේ විශේෂ රෝග කාරක රහිත තත්ත්ව යටතේ (SPF) තබා ඇත.
නිෂ්පාදකයාගේ උපදෙස් අනුව, elution පියවර සඳහා පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය ඇතුළුව, miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) භාවිතයෙන් BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes, BV2 සෛල සහ පටක වලින් සම්පූර්ණ RNA ලබා ගන්නා ලදී.RNA සාන්ද්‍රණය නැනෝ ඩ්‍රොප් 2000 වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාමාපකයක් මත තීරණය කරන ලදී.RNA ක්ෂුද්‍ර කිරණවල ගුණාත්මකභාවය Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands) භාවිතයෙන් තක්සේරු කරන ලදී.
10% exosome-poor FBS සහිත DMEM 100,000g දී ultracentrifugation මගින් පැය 16ක් 4°C දී සකස් කර 0.22 µm ෆිල්ටරයක් ​​හරහා පෙරීම (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 සෛල, 5 × 105, 10% exosome-ක්ෂය වූ FBS සහ 1% ප්‍රතිජීවක 37 ° C සහ 5% CO2 අඩංගු DMEM හි වගා කරන ලදී.ඉන්කියුබේෂන් පැය 24 කට පසු, RH හෝ ME49 (MOI = 10) වික්‍රියා වල tachyzoites සෛල වලට එකතු කරන ලද අතර ආක්‍රමණ නොවන පරපෝෂිතයන් පැයක් ඇතුළත ඉවත් කර DMEM සමඟ නැවත පුරවන ලදී.BV2 සෛල වලින් Exosomes හුදකලා කර ඇත්තේ වඩාත් බහුලව භාවිතා වන ක්‍රමය වන වෙනස් කරන ලද අවකල්‍ය කේන්ද්‍රාපසාරී මගිනි.RNA හෝ ප්‍රෝටීන් විශ්ලේෂණය සඳහා 300 µl PBS හි එක්සෝසෝම් පෙති නැවත ලබා දෙන්න.හුදකලා exosomes සාන්ද්‍රණය BCA ප්‍රෝටීන් තක්සේරු කට්ටලයක් (Pierce, Rockford, IL, USA) සහ NanoDrop 2000 spectrophotometer භාවිතා කර තීරණය කරන ලදී.
BV2 සෛල වලින් හෝ BV2 වලින් ලබාගත් exosomes වලින් ලැබෙන අවක්ෂේප PRO-PREP™ ප්‍රෝටීන නිස්සාරණ ද්‍රාවණය (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) තුළ ලයිස් කරන ලද අතර ප්‍රෝටීන Coomassie දීප්තිමත් නිල් පැහැති 10% SDS පොලිඇක්‍රිලමයිඩ් ජෙල් මතට පටවා ඇත.මීට අමතරව, ප්රෝටීන් පැය 2 ක් සඳහා PVDF පටල වෙත මාරු කරනු ලැබේ.Alix ප්‍රතිදේහ (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) exosomal සලකුණක් ලෙස භාවිතා කරමින් බටහිර පැල්ලම් වලංගු කරන ලදී.HRP-සංයුක්ත එළු-මූසික විරෝධී IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) සහ LAS-1000 plus luminescent image analysiser (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) ද්විතියික ප්‍රතිදේහයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී..එක්සෝසෝමවල ප්‍රමාණය සහ රූප විද්‍යාව අධ්‍යයනය කිරීම සඳහා සම්ප්‍රේෂණ ඉලෙක්ට්‍රෝන අන්වීක්ෂය සිදු කරන ලදී.BV2 සෛලවලින් (6.40 µg/µl) හුදකලා වූ Exosomes කාබන් ආලේපිත දැල් මත සකස් කර විනාඩි 1ක් සඳහා 2% යුරේනයිල් ඇසිටේට් සමඟ සෘණාත්මකව වර්ණාලේප කර ඇත.සකස් කරන ලද සාම්පල ES1000W Erlangshen CCD කැමරාවකින් (Gatan, Pleasanton, CA, USA) සමන්විත JEOL 1200-EX II (ටෝකියෝ, ජපානය) භාවිතා කරමින් 80 kV ක වේගවත් වෝල්ටීයතාවයකින් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.
BV2-ව්‍යුත්පන්න exosomes PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) භාවිතයෙන් විනාඩි 15ක් කාමර උෂ්ණත්වයේ දී පැල්ලම් කරන ලදී.U87 සෛල, 2×105, PKH26-ලේබල් කරන ලද exosomes (රතු) හෝ සෘණ පාලනයක් ලෙස exosomes නොමැති අතර, 5% CO2 ඉන්කියුබේටරයක පැය 24ක් සඳහා 37°C දී ඉන්කියුබේට් කරන ලදී.U87 සෛල න්යෂ්ටි DAPI (නිල්) වලින් වර්ණාලේප කර ඇත, U87 සෛල 4% paraformaldehyde හි විනාඩි 15 ක් 4 ° C දී සවි කර පසුව Leica TCS SP8 STED CW confocal අන්වීක්ෂ පද්ධතියක් (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) තුළ විශ්ලේෂණය කරන ලදී.නිරීක්ෂණය කළ හැකි.
mir-X siRNA පළමු නූල් සංස්ලේෂණය සහ SYBR qRT-PCR කට්ටලය (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) භාවිතයෙන් siRNA වලින් cDNA සංස්ලේෂණය කරන ලදී.තත්‍ය කාලීන ප්‍රමාණාත්මක PCR සිදු කරන ලද්දේ iQ5 තත්‍ය කාලීන PCR හඳුනාගැනීමේ පද්ධතිය (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) භාවිතයෙන් SYBR Premix සමඟ මිශ්‍ර වූ ප්‍රයිමර් සහ සැකිලි භාවිතා කරමිනි.ඩීඑන්ඒ චක්‍ර 40 ක් සඳහා 95 ° C දී තත්පර 15 ක් සහ 60 ° C දී තත්පර 60 ක් සඳහා විස්තාරණය කරන ලදී.එක් එක් PCR ප්‍රතික්‍රියාවේ දත්ත iQ™5 දෘශ්‍ය පද්ධති මෘදුකාංගයේ (Bio-Rad) දත්ත විශ්ලේෂණ මොඩියුලය භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තෝරාගත් ඉලක්ක ජාන සහ β-actin/siRNA (සහ U6) අතර ජාන ප්‍රකාශනයේ සාපේක්ෂ වෙනස්කම් සම්මත වක්‍ර ක්‍රමය භාවිතයෙන් ගණනය කරන ලදී.භාවිතා කරන ලද ප්‍රාථමික අනුපිළිවෙල වගුව 1 හි දක්වා ඇත.
3 x 104 U87 ග්ලියෝමා සෛල 96-ළිං තහඩු වල බීජ කර BV2 (50 μg/mL) හෝ BV2 (50 μg/mL) වලින් ලබාගත් ස්පන්දන නොවන exosomes වලින් ව්‍යුත්පන්න වූ Toxoplasma-ආසාදිත එක්සෝසෝම සමඟ මිශ්‍ර කර පැය 12, 18 සහ 136 වලදී පාලනය වේ. .සෛල ප්‍රගුණන අනුපාතය සෛල ගණන් කිරීමේ කට්ටලය-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) භාවිතයෙන් තීරණය කරන ලදී (පරිපූරක රූප S1-S3) 46 .
සති 5ක් වයසැති ගැහැණු BALB/c නිරුවත් මීයන් Orient Bio (Seongnam-si, South Korea) වෙතින් මිල දී ගෙන කාමර උෂ්ණත්වයේ (22±2°C) සහ ආර්ද්‍රතාවයේ (45±15°C) වඳ කූඩුවල තනි තනිව තබා ඇත.%) කාමර උෂ්ණත්වයේ දී (22± 2 ° C) සහ ආර්ද්රතාවය (45 ± 15%).SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center) යටතේ පැය 12ක ආලෝක චක්‍රයක් සහ පැය 12ක අඳුරු චක්‍රයක් සිදු කරන ලදී.මීයන් අහඹු ලෙස මීයන් 5 බැගින් වූ කණ්ඩායම් තුනකට බෙදා ඇති අතර සියලුම කණ්ඩායම් වලට චර්මාභ්යන්තරව එන්නත් කරන ලද PBS මිලි ලීටර් 400 ක් 1 x 107 U87 glioma සෛල අඩංගු වන අතර වර්ධන සාධකය අඩු කරන ලද BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA).ගෙඩියක් එන්නත් කිරීමෙන් දින හයකට පසු, BV2 සෛල වලින් (ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදනය සහිතව/ රහිතව) ලබාගත් එක්සෝසෝම මිලිග්‍රෑම් 200 ක් පිළිකා ඇති ස්ථානයට එන්නත් කරන ලදී.ගෙඩියක් ආසාදනය වී දින 22 කට පසු, එක් එක් කණ්ඩායමේ මීයන්ගේ ගෙඩියේ ප්‍රමාණය සතියකට තුන් වතාවක් කැලිපරයකින් මනිනු ලබන අතර, පිළිකා පරිමාව සූත්‍රය මගින් ගණනය කරන ලදී: 0.5×(පළල)×2×දිග.
MiRCURYTM LNA miRNA array භාවිතා කරමින් MicroRNA ප්‍රකාශන විශ්ලේෂණය, 7 වන පරම්පරාවේ mmu සහ rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) මානව, මූසික සහ මීයන් miRNA ග්‍රහණ පරීක්ෂණ 3100ක් අතර හොඳින් සංලක්ෂිත මීයන් 1119ක් ආවරණය කරයි.මෙම ක්‍රියා පටිපාටිය අතරතුර, 5′-පොස්පේට් වලින් සම්පූර්ණ RNA වලින් 250 සිට 1000 ng දක්වා ප්‍රමාණයක් වසු බඩවැලේ ක්ෂාරීය පොස්පේටේස් සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් පසුව Hy3 හරිත ප්‍රතිදීප්ත සායම් සමඟ ලේබල් කිරීම මගින් ඉවත් කරන ලදී.පසුව ලේබල් කරන ලද සාම්පල දෙමුහුන් කුටි කට්ටලයක් (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) සහ දෙමුහුන් ස්ලයිඩ කට්ටලයක් (Agilent Technologies) භාවිතයෙන් මයික්‍රෝ අරේ ස්ලයිඩ පැටවීම මගින් දෙමුහුන් කරන ලදී.56 ° C දී පැය 16 ක් සඳහා දෙමුහුන් කිරීම සිදු කරන ලද අතර, පසුව නිෂ්පාදකයාගේ නිර්දේශයන්ට අනුකූලව ක්ෂුද්ර ප්රෝටෝන සෝදා ඇත.සකසන ලද ක්ෂුද්‍ර අරා ස්ලයිඩ පසුව Agilent G2565CA microarray ස්කෑනර් පද්ධතියක් (Agilent Technologies) භාවිතයෙන් පරිලෝකනය කරන ලදී.ස්කෑන් කරන ලද පින්තූර Agilent Feature Extraction මෘදුකාංග අනුවාදය 10.7.3.1 (Agilent Technologies) භාවිතයෙන් ආනයනය කරන ලද අතර එක් එක් රූපයේ ප්‍රතිදීප්ත තීව්‍රතාවය වෙනස් කරන ලද Exiqon ප්‍රොටෝකෝලයේ අනුරූප GAL ගොනුව භාවිතයෙන් ප්‍රමාණ කරන ලදී.වත්මන් අධ්‍යයනය සඳහා Microarray දත්ත ප්‍රවේශ අංකය GPL32397 යටතේ GEO දත්ත ගබඩාවේ තැන්පත් කර ඇත.
ටොක්සොප්ලාස්මා ආසාදිත RH හෝ ME49 වික්‍රියා වල මයික්‍රොග්ලියා වල පරිණත exosomal miRNA වල ප්‍රකාශන පැතිකඩ විවිධ ජාල මෙවලම් භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.පිළිකා වර්ධනයට සම්බන්ධ miRNAs miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) භාවිතයෙන් හඳුනාගෙන 8.0 ට වැඩි සාමාන්‍ය සංඥා තීව්‍රතාවයකින් (log2) පෙරා ඇත.miRNA අතර, T. gondii ආසාදනය වූ RH හෝ ME49 වික්‍රියා මගින් වෙනස් කරන ලද miRNA වල පෙරහන් විශ්ලේෂණය මගින් වෙනස් ලෙස ප්‍රකාශිත miRNA 1.5 ගුණයකට වඩා වෙනස් වී ඇති බව සොයා ගන්නා ලදී.
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) භාවිතයෙන් opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) හි ළිං හයේ තහඩු (3 x 105 සෛල/ළිඳ) තුළ සෛල බීජ කරන ලදී.මාරු කරන ලද සෛල පැය 6 ක් සඳහා වගා කරන ලද අතර පසුව මාධ්යය නැවුම් සම්පූර්ණ මාධ්යයට වෙනස් කරන ලදී.සෛල මාරු කිරීමෙන් පැය 24 කට පසුව අස්වනු නෙලනු ලැබේ.
සංඛ්‍යාලේඛන විශ්ලේෂණය ප්‍රධාන වශයෙන් සිදු කරන ලද්දේ Excel මෘදුකාංගය (Microsoft, Washington, DC, USA) සමඟින් සිසුන්ගේ t-test භාවිතා කරමිනි.පර්යේෂණාත්මක සත්ව විශ්ලේෂණය සඳහා, Prism 3.0 මෘදුකාංගය (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) භාවිතයෙන් ද්වි-මාර්ග ANOVA සිදු කරන ලදී. P-අගය <0.05 සංඛ්‍යානමය වශයෙන් වැදගත් ලෙස සැලකේ. P-අගය <0.05 සංඛ්‍යානමය වශයෙන් වැදගත් ලෙස සැලකේ. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P අගයන් <0.05 සංඛ්‍යානමය වශයෙන් වැදගත් ලෙස සැලකේ. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P අගයන් <0.05 සංඛ්‍යානමය වශයෙන් වැදගත් ලෙස සැලකේ.
මෙම අධ්‍යයනයේදී භාවිතා කරන ලද සියලුම පර්යේෂණාත්මක ප්‍රොටෝකෝල සෝල් ජාතික විශ්වවිද්‍යාල වෛද්‍ය විද්‍යාලයේ ආයතනික සමාලෝචන මණ්ඩලය විසින් අනුමත කරන ලදී (IRB අංකය SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.2018 දී ඇස්තමේන්තුගත ගෝලීය පිළිකා සිදුවීම් සහ මරණ: GLOBOCAN මූලාශ්‍ර සහ ක්‍රම.අර්ථ දැක්වීම.J. Ruck 144, 1941-1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS මොළයේ පිළිකාවල අවදානම් සාධක සහ ඒවායේ චිකිත්සක මැදිහත්වීම් පිළිබඳ අවබෝධයක්. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS මොළයේ පිළිකාවල අවදානම් සාධක සහ ඒවායේ චිකිත්සක මැදිහත්වීම් පිළිබඳ අවබෝධයක්.Rashid, S., Rehman, K. සහ Akash, MS A මොළයේ පිළිකා සඳහා අවදානම් සාධක සහ ප්රධාන චිකිත්සක මැදිහත්වීම් පිළිබඳ සමාලෝචනය. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS මොළයේ පිළිකා අවදානම් සාධක සහ චිකිත්සක මැදිහත්වීම් පිළිබඳ ගැඹුරු අවබෝධයක්.Rashid, S., Rehman, K. සහ Akash, MS A මොළයේ පිළිකා සඳහා අවදානම් සාධක සහ ප්රධාන චිකිත්සක මැදිහත්වීම් පිළිබඳ සමාලෝචනය.ජෛව වෛද්ය විද්යාව.ඖෂධවේදියෙක්.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. මානව orodigestive සහ කාන්තා ලිංගික පත්රිකාවේ පිළිකා වල බැක්ටීරියා-වෛරස් අන්තර්ක්‍රියා: වසංගත රෝග සහ රසායනාගාර සාක්ෂිවල සාරාංශයක්. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. මානව orodigestive සහ කාන්තා ලිංගික පත්රිකාවේ පිළිකා වල බැක්ටීරියා-වෛරස් අන්තර්ක්‍රියා: වසංගත රෝග සහ රසායනාගාර සාක්ෂිවල සාරාංශයක්.Kato I., Zhang J. සහ Sun J. මානව ආමාශ ආන්ත්රයික පත්රිකාවේ සහ කාන්තා ලිංගික පත්රිකාවේ පිළිකා වල බැක්ටීරියා-වෛරස් අන්තර්ක්රියා: වසංගත රෝග සහ රසායනාගාර දත්තවල සාරාංශයකි. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用︎ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. මිනිස් මුඛ කුහරයේ ජීර්ණය සහ කාන්තා ප්‍රජනක පත්‍රිකාවේ බැක්ටීරියා-වෛරස් අන්තර්ක්‍රියා: ජනප්‍රිය රෝග විද්‍යාව සහ රසායනාගාර සාක්ෂි සාරාංශය.Kato I., Zhang J. සහ Sun J. මානව ආමාශ ආන්ත්රයික පිළිකා සහ කාන්තා ලිංගික පිළිකා වල බැක්ටීරියා-වෛරස් අන්තර්ක්රියා: වසංගත රෝග සහ රසායනාගාර දත්තවල සාරාංශයකි.පිළිකා 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL ආසාදනයේ සිට පිළිකා දක්වා: DNA පිළිකා වෛරස් ධාරක සෛල මධ්‍යම කාබන් සහ ලිපිඩ පරිවෘත්තීය වෙනස් කරන ආකාරය. Magon, KL & Parish, JL ආසාදනයේ සිට පිළිකා දක්වා: DNA පිළිකා වෛරස් ධාරක සෛල මධ්‍යම කාබන් සහ ලිපිඩ පරිවෘත්තීය වෙනස් කරන ආකාරය.Mahon, KL සහ Parish, JL ගිනි ආසාදනය පිළිකාවට: DNA මත පදනම් වූ පිළිකා වෛරස් ධාරක සෛල මධ්‍යම කාබන් සහ ලිපිඩ පරිවෘත්තීය වෙනස් කරන ආකාරය. Magon, KL & Parish, JL Magon, KL & Parish, JL ආසාදනයේ සිට පිළිකා දක්වා: DNA පිළිකා වෛරස් ධාරක සෛල මධ්‍යම කාබන් සහ ලිපිඩ පරිවෘත්තීය වෙනස් කරන ආකාරය.Mahon, KL සහ Parish, JL ෆයර්ස් ආසාදනය පිළිකා: DNA පිළිකා වෛරස් ධාරක සෛල තුළ මධ්‍යම කාබන් සහ ලිපිඩ පරිවෘත්තීය වෙනස් කරන ආකාරය.විවෘත ජීව විද්යාව.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.schistosomes සහ අක්මාව flukes සහ helminth ආශ්රිත පිළිකා වල Catechol estrogens.ඉදිරිපස.ඇතුළත උණුසුම්.5, 444 (2014).