Giardia duodenum යනු giardiasis ඇති කරන පරපෝෂිත ජීවියෙකි, විශේෂයෙන් කුඩා දරුවන්ට පාචනය පිළිබඳ සායනික සලකුණු ඇති බඩවැල් ආසාදනයකි.බාහිර සෛලීය G. duodenalis මගින් අන්තර් සෛලීය ඔලිගොමරීකරණය වැනි ප්‍රතිග්‍රාහක 3 (NLRP3) බන්ධන නියුක්ලියෝටයිඩ සක්‍රිය කිරීම සහ බාහිර සෛලීය වෙසිලි (EV) ස්‍රාවය හරහා ධාරක ගිනි අවුලුවන ප්‍රතිචාර නියාමනය කරන බව අපි කලින් වාර්තා කර ඇත්තෙමු.කෙසේ වෙතත්, මෙම ක්‍රියාවලියට සම්බන්ධ වන රෝග කාරක ආශ්‍රිත duodenococcal EV (GEV) හි නිශ්චිත අණුක රටා සහ giardiasis හි NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව පැහැදිලි කිරීමට ඉතිරිව ඇත.
GEV හි ප්‍රතිසංයෝජක යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ alpha-7.3 giardins ගොඩනගා, මවුස් ප්‍රාථමික peritoneal macrophages වෙත මාරු කර, දැවිල්ල ඉලක්කගත අණු කැස්පේස්-1 මැනීම මගින් අනාවරණය කර ගන්නා ලදී.p20 ප්‍රකාශන මට්ටම තිරගත විය..G. duodenalis alpha-2 සහ alpha-7.3 giardines NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 සහ caspase-1 p20), IL ස්‍රාවය මැනීම මගින් මුලින් හඳුනා ගන්නා ලදී.1β මට්ටම්, ඇපොප්ටෝටික් පැල්ලම් සහිත ප්‍රෝටීන් (ASC) ඔලිගොමරීකරණ මට්ටම් සහ NLRP3 සහ ASC හි ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රදේශය.G. duodenalis හි ව්‍යාධිජනකතාවයේ NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව පසුව NLRP3 සක්‍රිය කිරීම අවහිර කරන ලද මීයන් භාවිතයෙන් තක්සේරු කරන ලදී (NLRP3 අවහිර කළ මීයන්) සහ ශරීරයේ බර, duodenal පරපෝෂිත භාරය සහ duodenal පටක වල ව්යාධි වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.මීට අමතරව, අපි hiardines alpha-2 සහ alpha-7.3 NLRP3 ආසාධනය හරහා vivo තුළ IL-1β ස්‍රාවය ප්‍රේරණය කරන්නේද යන්න විමර්ශනය කළ අතර මීයන් තුළ G. duodenalis හි ව්‍යාධිජනකත්වය තුළ මෙම අණු වල කාර්යභාරය තීරණය කළෙමු.
Alpha-2 සහ alpha-7.3 giardines NLRP3 inflammasome in vitro සක්‍රිය කිරීමට හේතු වේ.මෙය p20 කැස්පේස්-1 සක්‍රිය කිරීමට හේතු විය, NLRP3, pro-IL-1β, සහ pro-caspase-1 ප්‍රෝටීන වල ප්‍රකාශන මට්ටම්වල වැඩි වීමක්, IL-1β ස්‍රාවයේ සැලකිය යුතු වැඩි වීමක්, ASA ලප සෑදීම සයිටොප්ලාස්ම්, සහ ASA ඔලිගොමරීකරණයේ ප්‍රේරණය.NLRP3 දැවිල්ල ශිෂේණය ඍජු අහිමි වීම මීයන් තුළ G. duodenalis හි ව්යාධිජනකත්වය උග්ර කරයි.NLRP3-අවහිර කරන ලද මීයන්ගෙන් ගැවේජ් මගින් ගෙඩි සමඟ ප්‍රතිකාර කරන මීයන් ට්‍රොෆොසොයිට් සංඛ්‍යාව වැඩි වූ අතර duodenal villi වලට දැඩි හානියක් පෙන්නුම් කරයි, එය හැකිලුණු සහ අතු බෙදී ඇති necrotic crypts මගින් සංලක්ෂිත වේ.vivo අත්හදා බැලීම් වලදී giardines alpha-2 සහ alpha-7.3 මගින් NLRP3 ආසාධනය හරහා IL-1β ස්‍රාවය කළ හැකි බව පෙන්වා දී ඇති අතර, giardines alpha-2 සහ alpha-7.3 සමඟ ප්‍රතිශක්තිකරණය මීයන් තුළ G. duodenalis හි ව්යාධිජනක බව අඩු කරයි.
එකට ගත් විට, මෙම අධ්‍යයනයේ ප්‍රතිඵල යෝජනා කරන්නේ giardia alpha-2 සහ alpha-7.3 මගින් ධාරක NLRP3 දැවිල්ල පාලනය කිරීමට සහ giardiasis වැළැක්වීම සඳහා පොරොන්දු වූ ඉලක්ක වන මීයන් තුළ G. duodenalis ආසාදනය අඩු කරන බවයි.
Giardia duodenum යනු කුඩා අන්ත්‍රය තුළ ජීවත් වන බාහිර සෛලීය ප්‍රොටෝසෝවා පරපෝෂිතයෙකි, විශේෂයෙන් සංවර්ධනය වෙමින් පවතින රටවල කුඩා ළමුන් අතර වාර්ෂිකව පාචනය සමඟ giardiasis රෝගීන් මිලියන 280 ක් ඇති කරයි [1].M. duodenum cysts වලින් අපවිත්‍ර වූ ජලය පානය කිරීමෙන් හෝ ආහාර ගැනීමෙන් මිනිසුන් ආසාදනය වන අතර ඒවා ආමාශයට ඇතුළු වී ආමාශයික යුෂ වලින් බැහැර කරයි.Giardia duodenum trophozoites duodenal epithelium වෙත සම්බන්ධ වන අතර, ඔක්කාරය, වමනය, පාචනය, උදර වේදනාව සහ බර අඩු වීම ඇති කරයි.ප්රතිශක්ති ඌනතා සහ සිස්ටික් ෆයිබ්රෝසිස් ඇති පුද්ගලයින් ආසාදනයට ගොදුරු වේ.මුඛ සහ ගුද සංසර්ගය හරහා ද ආසාදනය සිදුවිය හැක [2].මෙට්‍රොනිඩසෝල්, ටිනිඩසෝල් සහ නයිටසොක්සැනයිඩ් වැනි ඖෂධ duodenal ආසාදන සඳහා වඩාත් කැමති ප්‍රතිකාර විකල්පයන් වේ [3].කෙසේ වෙතත්, මෙම රසායනික චිකිත්සක ඖෂධ ඔක්කාරය, පිළිකා කාරක සහ ජෙනෝටොක්සිසිටි [4] වැනි අහිතකර අතුරු ආබාධ ඇති කරයි.එබැවින් G. duodenalis ආසාදනය වැලැක්වීම සඳහා වඩාත් ඵලදායී උපාය මාර්ග සකස් කිරීම අවශ්ය වේ.
ප්‍රදාහයන් යනු සහජ ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාරයේ කොටසක් වන සයිටොසොලික් ප්‍රෝටීන් සංකීර්ණ කාණ්ඩයකි, රෝග කාරක ආක්‍රමණයෙන් ආරක්ෂා වීමට සහ ගිනි අවුලුවන ප්‍රතිචාර මධ්‍යස්ථ කිරීමට උපකාරී වේ [5].මෙම ප්‍රදාහයන් අතර, නියුක්ලියෝටයිඩ-බන්ධන ඔලිගොමරීකරණය (NOD) ප්‍රතිග්‍රාහක 3 (NLRP3) නියුක්ලියෝටයිඩ-බන්ධන ඔලිගොමරීකරණය (NLRP3) නියුක්ලියෝටයිඩ-බන්ධන වැනි ප්‍රදාහය පුළුල් ලෙස අධ්‍යයනය කර ඇත්තේ එය විවිධ රෝග කාරක/හානි/ආශ්‍රිත රටා මගින් හඳුනාගත හැකි බැවිනි. DAMP), සහජ ප්‍රතිශක්තිකරණ පද්ධතිය හඳුනාගෙන සක්‍රීය කරයි.සහ බොහෝ ගිනි අවුලුවන රෝග [6,7,8] තුළ බඩවැල් හෝමියස්ටැසිස් පාලනය කරයි.එය රටා හඳුනාගැනීමේ ප්‍රතිග්‍රාහක (PRR) NLRP3, ඇඩැප්ටර ඇපොප්ටෝටික් පැල්ලම් සහිත ප්‍රෝටීනයක් (ASC) සහ ප්‍රයෝගික ප්‍රොකාස්පේස්-1 හෝ ප්‍රොකාස්පේස්-11 වලින් සමන්විත වේ.Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10] සහ Leishmania අධ්‍යයනයන්හි නිරීක්ෂණය කරන ලද පරිදි NLRP3 ගිනි අවුලුවන රෝග කාරක ආක්‍රමණයට එරෙහිව ධාරකයක් ලෙස ක්‍රියා කරයි.[11], නමුත් NLRP3 ගිනි අවුලුවන සක්‍රීය කිරීම ආරක්ෂිත ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාර සීමා කරන අතර රෝග ප්‍රගතිය උග්‍ර කරයි, උදාහරණයක් ලෙස පණුවන් [12].අපගේ පෙර සොයාගැනීම් මත පදනම්ව, අපි වාර්තා කළේ බාහිර සෛලීය G. duodenalis මගින් NLRP3 දැවිල්ල අන්තර් සෛලීය සක්‍රීය කිරීම සහ බාහිර සෛලීය vesicles (EVs) ස්‍රාවය කිරීම මගින් ධාරක ගිනි අවුලුවන ප්‍රතිචාර මොඩියුලේට් කරන බවයි [13].කෙසේ වෙතත්, vivo තුළ G. duodenalis ආසාදනයෙහි NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව තීරණය කිරීමට ඉතිරිව ඇත.
Giardins මුලින් G. duodenalis cytoskeleton හි ව්‍යුහාත්මක සංරචක ලෙස විස්තර කරන ලද අතර කුඩා අන්ත්‍රයේ ට්‍රොෆොසොයිට් චලනය සහ අපිච්ඡද සෛල බැඳීමෙහි වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි.පරිසරයට වඩා හොඳින් අනුවර්තනය වීමට සහ ඔවුන්ගේ ව්යාධිජනක බව වැඩි කිරීමට, G. duodenalis trophozoites 8 ෆ්ලැජෙල්ලා, 1 මැද සිරුර සහ 1 කශේරුකා තැටිය [14] කින් සමන්විත අද්විතීය සයිටොස්කෙලිටල් ව්යුහයක් වර්ධනය කළේය.Giardia duodenum හි trophozoites ඉහළ කුඩා අන්ත්‍රය, විශේෂයෙන් duodenum විනිවිද යාමට සහ enterocytes වෙත සම්බන්ධ කිරීමට ඔවුන්ගේ සයිටොස්කෙලිටන් භාවිතා කරයි.ඔවුන් නිරන්තරයෙන් සංක්රමණය වන අතර සෛල පරිවෘත්තීය භාවිතයෙන් අපිච්ඡද සෛල වෙත සම්බන්ධ වේ.එමනිසා, ඔවුන්ගේ සෛල ඇටසැකිල්ල සහ වයිරස් අතර සමීප සම්බන්ධතාවයක් පවතී.Giardia duodenum සඳහා විශේෂිත වූ Giardines සයිටොස්කෙලිටන් ව්‍යුහයේ [15] සංරචක වන අතර ඒවා කාණ්ඩ හතරකට බෙදා ඇත: α-, β-, γ- සහ δ-giardines.α-giardin පවුලේ සාමාජිකයින් 21 දෙනෙකු සිටින අතර, ඔවුන් සියල්ලන්ටම ෆොස්ෆොලිපිඩ් බැඳීමට කැල්සියම් මත යැපෙන හැකියාව ඇත [16].ඔවුන් සයිටොස්කෙලිටන් සෛල පටලයට සම්බන්ධ කරයි.G. duodenalis නිසා ඇති වන පාචනය ඇති පුද්ගලයින් තුළ, α-giardins ආසාදනය අතරතුර ප්‍රතිශක්තිකරණ ක්‍රියාකාරීත්වය ඉහළ මට්ටමක පවතී.Giardia alfa-1 මත පදනම් වූ විෂම එන්නත් මීයන් තුළ giardiasis වලින් ආරක්ෂා වන අතර එන්නත් සංවර්ධනය සඳහා විභව අපේක්ෂක ප්‍රතිදේහජනක වේ [18].ඇල්ෆා-8 ජියර්ඩින්, ප්ලාස්මා පටලයේ සහ ෆ්ලැජෙල්ලා තුළ ස්ථානගත කර ඇත, නමුත් කශේරුකා තැටියේ නොවේ, G. duodenalis [19] හි ට්‍රොෆොසොයිට් වල චලනය හා වර්ධන වේගය වැඩි කරයි.Alpha-14 giardin, flagella මත ඇති ක්ෂුද්‍ර නල ව්‍යුහයන්ට සම්බන්ධ වන අතර G. duodenalis [20] වල ශක්‍යතාවයට බලපායි.Alpha-11 giardine ජීවන චක්‍රය පුරා බහුලව පවතින අතර, alpha-11 giardine අධික ලෙස ප්‍රකාශ කිරීම G. duodenalis හටම හානි කරයි [21].කෙසේ වෙතත්, alpha-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine G. duodenalis ආසාදනයට සහ ඒවායේ යටින් පවතින යාන්ත්‍රණවලට එරෙහිව ආරක්ෂා කරන්නේද යන්න පැහැදිලි නැත.
මෙම අධ්‍යයනයේදී, ධාරක NLRP3 සක්‍රිය කිරීම සඳහා ප්‍රතිසංයෝජක යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine මවුස් ප්‍රාථමික පෙරිටෝනියල් මැක්‍රෝෆේජ් වෙත මාරු කරන ලදී.ගිනි අවුලුවන ඉලක්ක පසුව පරීක්ෂා කරන ලදී.අපි G. duodenalis හි ව්‍යාධිජනකතාවයේ NLRP3 ගිනි අවුලුවන කාර්යභාරය තක්සේරු කළෙමු, alpha-2 සහ alpha-7,3 giardines vivo තුළ NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රිය කිරීමට පොළඹවන්නේද යන්න විමර්ශනය කළ අතර, මෙම giardines වල මෙම භූමිකාවන් දෙක ව්යාධිජනක බව තීරණය කළෙමු. G. duodenalis.අපගේ පොදු ඉලක්කය වූයේ G. duodenalis ආසාදනය වැලැක්වීම සඳහා පොරොන්දු වූ ඉලක්ක වර්ධනය කිරීමයි.
වල් වර්ගය (WT) C57BL/6 සති 5-8 වයසැති ගැහැණු මීයන් Liaoning Changsheng පර්යේෂණාත්මක සත්ව මධ්‍යස්ථානයෙන් (Liaoning, China) මිලදී ගන්නා ලදී.මීයන්ට ජලය සඳහා නොමිලේ ප්‍රවේශ විය, විෂබීජහරණය කළ ආහාර ලැබුණු අතර පැය 12/12 ආලෝක/අඳුරු චක්‍රයක තබා ඇත.ආසාදනය වීමට පෙර, මීයන්ට ඇම්පිසිලින් (1 mg/mL), vancomycin (1 mg/mL), සහ neomycin (1.4 mg/mL) (සියල්ලම චීනයේ ෂැංහයි, කෘත්‍රිම ජීවීන්ගෙන් මිලදී ගත්) සමඟ පරිපූරක පානීය ජලයෙන් ප්‍රතිජීවක ඖෂධ ලබා ගන්නා ලදී. ].].පැය 24කට වැඩි කාලයක් කෑමට සහ බීමට හැකියාව නැති වූ සහ ≥ 20% ශරීර බර අඩු වූ මීයන් ගැබ්ගෙල විස්ථාපනය මගින් මානුෂීය ලෙස ඝාතනය කරන ලදී.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) 12.5% ​​fetal bovine serum (FBS; Every Green, Zhejiang, China) සහ 0.1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. )ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) ක්ෂුද්ර වායුගෝලීය තත්වයන් යටතේ.සංගම ට්‍රොෆොසොයිට් අයිස් මත එකතු කර වැඩිදුර ප්‍රජනනය සඳහා 1:4 අනුපාතයකින් ගමන් කරන ලදී.
Giardia duodenum cysts පෙර විස්තර කර ඇති පරිදි ප්‍රේරණය කරන ලදී [23], trophozoites ලඝුගණක අවධියේදී අස්වනු නෙළන ලද අතර පසුව 1 × 106 trophozoites/mL අවසාන සාන්ද්‍රණයට pH 7.1 (වෙනස් කරන ලද TYI-S-33) සංවෘත ප්‍රේරක මාධ්‍යයෙන් තනුක කරන ලදී.පිත සාන්ද්‍රණය 0.05% මධ්‍යම).Trophozoites ලඝුගණක වර්ධන අවධිය දක්වා 37 ° C දී නිර්වායු තත්ව යටතේ වගා කරන ලදී.මාධ්‍යය cyst inducing media (pH 7.8; 1% පිත සාන්ද්‍රණය සහිත නවීකරණය කරන ලද TYI-S-33 මාධ්‍යය) සහ සංස්කෘතිය G. duodenalis පැය 48-96 අතර කාලයක් 37 ° C දී අන්වීක්ෂයක් යටතේ ඇති වන විසප්පු නිරීක්ෂණය කරන ලදී.බොහෝ ට්‍රොෆොසොයිට් ගෙඩි සෑදීමට ප්‍රේරණය කළ පසු, වගා මිශ්‍රණය අස්වනු නෙළා ඉතිරි ට්‍රොෆොසොයිට් ලයිස් කිරීම සඳහා විෂබීජහරණය කළ ඩයෝනීකරණය කළ ජලයේ නැවත ලබා දෙන ලදී.මීයන් තුළ ආමාශයික නලයක් හරහා පසු විශ්ලේෂණ සඳහා cysts ගණනය කර 4 ° C දී ගබඩා කර ඇත.
Giardia Extracellular vesicles (GEVs) පෙර විස්තර කර ඇති පරිදි පොහොසත් කරන ලදී [13].ලඝුගණක වර්ධන අවධියේ ඇති ට්‍රොෆොසොයිට් 1 × 106 පරපෝෂිතයන්/mL අවසාන සාන්ද්‍රණයකට exosome-ක්ෂය වූ FBS (Biological Industries, Beit-Haemek, ඊශ්‍රායලය) සමඟින් සකස් කරන ලද නවීකරණය කරන ලද TYI-S-33 මාධ්‍යයේ නැවත ලබා දී පැය 12ක් පුර්වකාශනය කරන ලදී.2000 ග්රෑම් විනාඩි 10 ක්, ග්රෑම් 10,000 විනාඩි 45 ක් සහ ග්රෑම් 100,000 විනාඩි 60 ක් සඳහා කේන්ද්රාපසාරී කිරීම මගින් සංස්කෘතිය අධිප්රමාණවලින් හුදකලා විය.වර්ෂාපතන පොස්පේට් බෆරඩ් සේලයින් (PBS) තුළ දිය කර, BCA ප්‍රෝටීන් විශ්ලේෂණ කට්ටලයක් (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) භාවිතයෙන් ප්‍රමාණනය කර -80° C. හි ගබඩා කර හෝ වැඩිදුර විශ්ලේෂණ සඳහා සෘජුවම භාවිතා කරන ලදී.
ප්‍රාථමික මූසික පෙරිටෝනියල් මැක්‍රෝෆේජ් කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි සකස් කරන ලදී [24].කෙටියෙන් කිවහොත්, මීයන්ට (සති 6-8 වයස්වල) එන්නත් කර (අන්තර්පෙරිටෝනියලි [ip]) 2.98% ඩිෆ්කෝ ද්‍රව තයොග්ලිකෝල් මාධ්‍යයේ (බීඩී, ෆ්‍රෑන්ක්ලින් ලේක්ස්, එන්ජේ, යූඑස්ඒ) මිලිලීටර් 2.5ක් සමඟින් තාල 3-4ක් පෝෂණය කරන ලදී.දයානුකම්පාවෙන් පසු මීයන්ගේ උදර කුහරයෙන් මැක්‍රෝෆේජ් අත්හිටුවීමක් එකතු කර විනාඩි 10 ක් සඳහා ග්‍රෑම් 1000 ට 3 වතාවක් කේන්ද්‍රාපසාරී කරන ලදී.සෛල සංශුද්ධතාවය > 98% වන තෙක් CD11b මාර්කර් භාවිතා කරමින් ප්‍රවාහ සයිටොමෙට්‍රි මගින් අස්වනු නෙලන ලද සෛල අනාවරණය කර, පසුව ළිං 6 කින් යුත් සෛල සංස්කෘතික තහඩු (4.5 x 106 සෛල/ළිඳ) වෙත එකතු කර 37 ° C දී 10% FBS (Bioindustry) සමඟ පුර්වීකරණය කරන ලදී.සහ 5% CO2.
TRIzol ප්‍රතික්‍රියාකාරක මිලි ලීටර් 1 ක (Vazyme, Nanjing, China) 1 × 107 ට්‍රොෆොසොයිට් වලින් RNA නිස්සාරණය කරන ලදී, MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) භාවිතයෙන් ප්‍රවේණික DNA සම්පූර්ණ G. duodenalis RNA වලින් උපුටා ගන්නා ලද අතර අනුපූරක DNA (cDNA) සමමුහුර්ත කරන ලදී. නිෂ්පාදකයාගේ උපදෙස් අනුව MonScript RTIIII Super Mix (Monad) භාවිතා කිරීම.
ඉලක්කගත G. duodenalis ජානය සඳහා CDS අනුක්‍රමික තොරතුරු NCBI GenBank වෙතින් ලබා ගන්නා ලදී.එක් එක් ඉලක්ක ජාන සඳහා නිශ්චිත බාධාවකින් තොරව ක්ලෝනකරණ ප්‍රයිමර් නිර්මාණය කිරීමට ප්‍රයිමර් 5.0 භාවිතා කරන්න.ඉදිරි ප්‍රාථමිකය (5′-3′) කොටස් තුනකින් සමන්විත වේ: රේඛීය දෛශික pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) සමඟ අතිච්ඡාදනය වන අනුපිළිවෙලක් සහ කෝඩෝන ATG සහ GNN ආරම්භ කරන්න (පළමු පාදය G නොවේ නම්).ප්රකාශනයේ කාර්යක්ෂමතාව වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා මෙය සිදු කෙරේ.මීට අමතරව, අවම වශයෙන් 16 bp ඒකාබද්ධ භෂ්ම (GC අන්තර්ගතය 40-60%/Tm ආසන්න වශයෙන්. 55 °C).ප්‍රතිලෝම ප්‍රාථමිකය (5′-3′) කොටස් දෙකකින් සමන්විත වේ, EcoRV-රේඛීය දෛශික pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) සහ අවම වශයෙන් 16 bp ක ඒකාබද්ධ පදනමක් සහිත අතිච්ඡාදනය වන අනුපිළිවෙලකි.(අවසන් නැවතුම් දෙක හැර).භෂ්ම) ප්‍රතිසංයෝජක ප්ලාස්මිඩ වලට ඒවායේ ලේබල් කළ ප්‍රෝටීන ප්‍රකාශ කිරීමට ඉඩ සලසන AA හෝ GA වැනි කෝඩෝනයකි.ප්‍රාථමික අනුපිළිවෙලවල් වගුව 1 හි ලැයිස්තුගත කර ඇති අතර සීමාසහිත Kangmet Biotechnology Co. (Changchun, China) විසින් සංස්ලේෂණය කරන ලදී.
සැකිල්ලක් ලෙස සකස් කරන ලද G. duodenalis cDNA භාවිතා කරමින් Pfu DNA පොලිමරේස් (Tiangen, Beijing, China) හෝ Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) භාවිතයෙන් ඉලක්ක විස්තාරණය කරන ලදී.යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන දෛශික ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+) සීමා කිරීමේ එන්සයිමය EcoRV සමඟ රේඛීයකරණය කරන ලද අතර Fast AP (Thermo Fisher Scientific) භාවිතයෙන් dephosphorylated කරන ලදී.රේඛීය pcDNA3.1(+) කොටස් සහ විස්තාරණය කරන ලද ඉලක්කගත ජාන කොටස් DNA ජෙල් පිරිපහදු කට්ටලයක් (Tiangen) භාවිතයෙන් පවිත්‍ර කරන ලද අතර Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) භාවිතයෙන් ප්‍රමාණනය කරන ලදී.pcDNA3.1(+) කොටස සහ සෑම ඉලක්කගත ජාන කැබැල්ලක්ම MonClone තනි එකලස් ක්ලෝනීකරණ මිශ්‍රණය (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) භාවිතයෙන් නැවත ඒකාබද්ධ කරන ලද අතර Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China) භාවිතයෙන් DNA අනුපිළිවෙලින් තහවුරු කරන ලදී..
එන්ඩොටොක්සින්-නිදහස් ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech) භාවිතයෙන් ජනනය කරන ලදී.elution buffer හි EDTA මාරු කිරීමේ තක්සේරුවට බාධා නොකරන බව සහතික කිරීම සඳහා සාන්ද්‍රණය 500 ng/µl ට වඩා ඉහළින් පවත්වා ගෙන යන ලදී.ප්‍රාථමික මූසික peritoneal macrophages පැය 12 ක් සම්පූර්ණ RPMI 1640 මාධ්‍ය (ජීව විද්‍යාත්මක කර්මාන්ත) සහිත ළිං 6 කින් යුත් තහඩු වල වගා කරන ලදී, පසුව පෙනිසිලින් සහ ස්ට්‍රෙප්ටොමයිසින් ඉවත් කිරීම සඳහා සෛල උණුසුම් PBS වලින් 3 වතාවක් සෝදා, පසුව මධ්‍යස්ථව සම්පූර්ණ මාධ්‍යයෙන් අතිරේක කරන ලදී.එන්ඩොටොක්සින්-නිදහස් ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) Opti-MEM අඩු කළ මස්තු මාධ්‍ය (Gibco, Thermo Fisher Scientific) 125 μl හි තනුක කර ඇත..ඉන්පසු Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) 5 µl අඩු serum Opti-MEM මාධ්‍යයේ 125 µl තුළ තනුක කරන ලදී.Lipofectamine 2000 සමඟ තනුක කළ එන්ඩොටොක්සින්-නිදහස් ප්ලාස්මිඩය මිශ්‍ර කර එම මිශ්‍රණය කාමර උෂ්ණත්වයේ විනාඩි 5ක් සිටීමට ඉඩ සලසමින් liposome-DNA සංකීර්ණ සකස් කරන්න.එක් එක් ළිඳෙහි සෛල වලට සංකීර්ණ වෙන වෙනම මාරු කර සෙමින් මිශ්ර කරන්න.පැය 4 කට පසු, සෛල සංස්කෘතික මාධ්‍යය සම්පූර්ණ RPMI 1640 මාධ්‍යයේ මිලි ලීටර් 2 ක් සමඟ ප්‍රතිස්ථාපනය කරන ලද අතර පැය 24 ක් සංස්කෘතිය අඛණ්ඩව පැවතුනි.නැවුම් සෛල සංස්කෘතික මාධ්‍යය සෛලවලට එකතු කරන ලද අතර විශ්ලේෂණ සැලසුම මත පදනම්ව විවිධ කාල ලක්ෂ්‍යයන් සඳහා පුර්වගත කරන ලදී.
සුපර්නැටන්ට් සහ සෛල ලයිසේට් වලින් ප්‍රෝටීන් සාම්පල පෙර විස්තර කර ඇති පරිදි සකස් කරන ලදී [25].Pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin සහ His-tag සඳහා පටල හුවමාරු පරාමිතීන් 200 mA/90 min වේ.interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, Switzerland) සහ NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) සහ 1:5000 සඳහා ඔහුගේ Scient, ඉලක්ක කරමින් Wuhan, China) සහ β-actin (Proteintech, Wuhan, China).
Disuccinimide suberate (DSS) සමඟ හරස් සම්බන්ධ කිරීම කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි සිදු කරන ලදී [26].25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES සහ 125 mM NaHCO3 අඩංගු 50 µl ASC ප්‍රතික්‍රියා බෆරයේ (pH 8.0) 27 ගේජ් ඉඳිකටුවකින් සෛල 3 වතාවක් සීතල PBS වලින් සෝදා සම්පූර්ණයෙන්ම ලයිස් කරන ලදී.මිශ්‍රණය ග්‍රෑම් 5000 ට විනාඩි 3 ක් කේන්ද්‍රාපසාරී කර ඇති අතර පෙති 10 µl DSS (DMSO හි 25 mM) සහ 40 µl ASC ප්‍රතික්‍රියා බෆරයකින් විනාඩි 30 ක් 37 ° C දී මැහුම් කරන ලදී.මිනිත්තු 10 ක් සඳහා ග්‍රෑම් 5000 ට කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීමෙන් පසු, පෙති ASC ප්‍රතික්‍රියා බෆරයේ 40 µl සහ 6x ප්‍රෝටීන් පැටවීමේ බෆරයේ 10 µl ද්‍රාවණයක (TransGen, Beijing, China) ද්‍රාවණය කළ අතර පසුව ද්‍රාවණය කාමර උෂ්ණත්වයේ දී 15 ක් නිවා දමනු ලැබේ. මිනි., ඉන්පසු විනාඩි 10 ක් උනු.ප්‍රෝටීන් සාම්පල 1:500 තනුක අනුපාතයකින් ප්‍රාථමික ප්‍රති-ASC ප්‍රතිදේහ (Wanleibio, Shenyang, China) භාවිතයෙන් බටහිර බ්ලොටිං වලට ලක් කරන ලදී.
කලින් විස්තර කරන ලද ක්‍රියා පටිපාටියක් අනුගමනය කරමින් [13], සෛල සංස්කෘතියේ අධි ප්‍රවාහකයන් අස්වනු නෙළන ලද අතර මූසික IL-1 Beta ELISA කට්ටලය (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) භාවිතයෙන් ප්‍රෝ-ගිනි අවුලුවන සයිටොකයින් IL-1β ස්‍රාවය කිරීම තීරණය කරන ලදී.IL-1β සම්මත වක්‍රය භාවිතයෙන් OD450nm අගයන් ප්‍රෝටීන් සාන්ද්‍රණයට පරිවර්තනය කරන්න.
ආවරණ මත ආලේප කරන ලද සෛල උණුසුම් PBS හි 3 වතාවක් මෘදු ලෙස සෝදා, කාමර උෂ්ණත්වයේ (RT), 0.1% Triton X-Permeabilize 100 ට (PBS; Biosharp; Biosharp) දී විනාඩි 10 ක් සඳහා පටක සෛල සවිකිරීමේ (Biosharp, Beijing, China) සවි කර ඇත. ) කාමර උෂ්ණත්වයේ දී විනාඩි 20 ක් සහ කාමර උෂ්ණත්වයේ දී පැය 2 ක් සඳහා 5% bovine serum albumin (PBS හි) අවහිර කරන්න.ඉන්පසුව සෛල පිළිවෙලින් ASC (1:100 තනුක) හෝ NLRP3 (1:100 තනුක) ට එරෙහිව ප්‍රාථමික ප්‍රතිදේහ සමඟින් 4°C දී එක රැයකින් පුර්වාගත කරන ලදී, සහ Cy3 ලේබල් කළ එළු-හාවා විරෝධී IgG(H+L) (1:400; EarthOx , San Francisco, CA, USA) හෝ FITC-සංයෝජක එළු-මූසික විරෝධී IgG (1:400; Earthox) එක රැයකින් 37°C අඳුරේ පැය 1ක්.න්‍යෂ්ටීන් Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) සමඟ මිනිත්තු 5ක් පැල්ලම් කර ප්‍රතිදීප්ත අන්වීක්ෂයක් (Olympus Corporation, Tokyo, Japan) යටතේ නිරීක්ෂණය කරන ලදී.
මීයන් කණ්ඩායම් හතරකට බෙදා ඇත (එක් එක් කණ්ඩායමෙහි n = 7): (i) PBS-ප්‍රතිකාර කරන ලද සෘණ පාලන කණ්ඩායම (PBS පමණි; gavage 100 µl/mouse PBS පසුව දෛනික අභ්‍යන්තර එන්නත් 100 µl/mouse PBS පැය 3 කට පසුව) ., දින 7 ක් අඛණ්ඩව);(ii) MCC950 inhibitor [27] සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද සෘණ පාලන කණ්ඩායම (PBS gavage හරහා 100 µl/mouse, පැය 3 කට පසුව, 10 mg/kg ශරීර බර [BW] MCC950 [PBS හි] දිනපතා අභ්‍යන්තරව පරිපාලනය කරන ලදී, කාලසීමාව දින 7;(iii) G. duodenalis cyst ආසාදන කණ්ඩායම (1.5 x 106 cysts/mouse by gavage, පැය 3 කට පසුව, 100 μl/mouse PBS intraperitoneally දින 7ක් සඳහා දිනපතා පරිපාලනය කරනු ලැබේ);(iv) G. duodenalis cyst ඒකාබද්ධ ආසාදන කණ්ඩායම MCC950 inhibitor ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම (1.5×106 cysts/mouse හරහා gavage, 10mg/kg ශරීර බර MCC950 intraperitoneally දිනපතා 3h ට).සෑම මීයෙකුගේම සිරුරේ බර දිනපතා නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර 7 වන දිනයේදී සියලුම මීයන් මරා දමන ලදී.අස්වනු නෙළන ලද duodenum (සෙන්ටිමීටර 3 ක් දිග) 1 ml PBS හි කුඩා කැබලිවලට කපා, Cysts 4 ° C දී PBS හි එක රැයකින් විනාශ කරන ලදී, සහ G. duodenalis trophozoites.නැවුම් duodenum (1 cm දිග) hematoxylin සහ eosin (H&E) පැල්ලම් සඳහා හුදකලා විය.
මීයන් කණ්ඩායම් දෙකකට බෙදා ඇත: (i) MOCK පාලන කණ්ඩායම සහ (ii) MCC950 inhibitor කණ්ඩායම.එක් එක් කණ්ඩායම තුළ ප්‍රතිකාර පහක් විය (n = 7/ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම): (i) PBS ප්‍රතිකාර සෘණ පාලන කණ්ඩායම (PBS පමණි; 100 µl/mouse PBS, intramuscular (IM) එන්නත් (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ප්ලාස්මිඩ් සෘණ පාලන කණ්ඩායම (100 µg/mouse DNA, මාංශ පේශි එන්නත් කිරීම හරහා) G. duodenalis cyst ආසාදන ධනාත්මක පාලන කණ්ඩායම (1.5 x 106 cysts/mouse, gavage හරහා) (iv) a ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/mouse DNA, අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් මගින්) සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද කණ්ඩායමක් සහ (v) ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/mouse) සමඟ ප්‍රතිකාර කරන කණ්ඩායමක් DNA, ඡේදයෙන් පැය 12 කට පසුව, MCC950 inhibitor කාණ්ඩයේ මීයන්ට දින 7ක් සඳහා MCC950 (10 mg/kg සිරුරේ බර) දෛනික අභ්‍යන්තර පරිත්‍යාග එන්නත් කරන ලද අතර MOCK කාණ්ඩයේ මීයන්ට PBS ප්‍රතිකාරයේ සමාන පරිමාවක් ලැබුණි. රුධිර සාම්පල ලබා ගන්නා ලදී. IL-1β මට්ටම් සහ මිනුම් සඳහා එන්සයිම සම්බන්ධිත ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය (ELISA) භාවිතා කරමින් 4 °C සෙරුමය සාම්පල හුදකලා කරන ලදී.
මීයන් තිස්පහක් කණ්ඩායම් පහකට බෙදා ඇත (n=7/group).1 කණ්ඩායම PBS සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද සෘණ පාලන කණ්ඩායමකි: මීයන්ට PBS 100 μl අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි සහ දින 3 කට පසුව ගවේජ් මගින් ලබා ගන්නා ලදී.2 කාණ්ඩය යනු G. duodenalis cysts ආසාදනය වූ ධනාත්මක පාලන කණ්ඩායමකි: මීයන්ට PBS 100 μl එන්නත් කරන ලද අතර දින 3 කට පසුව 1.5 x 106 cysts/mouse intragastrically එන්නත් කරන ලදී.තෙවන කණ්ඩායම - duodenal cyst ආසාදනය සඳහා පාලන කණ්ඩායමක් සමඟ ඒකාබද්ධව pcDNA3.1 (+) සමඟ ප්ලාස්මිඩ් ප්‍රතිශක්තිකරණය: මීයන්ට ප්ලාස්මිඩ් DNA pcDNA3.1 (+) (im) 100 μg වාචිකව, 1.5×106 cysts/mouse 3 කිහිපයක් සඳහා ලැබුණි. දින.කණ්ඩායම් 4 සහ 5 G. duodenalis cyst ආසාදනය සමඟ ඒකාබද්ධව pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid හෝ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine plasmid.පර්යේෂණ කණ්ඩායම: මීයන්ට pcDNA3 100 μg ලැබිණි.1(+)-giardine plasmid DNA (im), ඉන් දින 3 කට පසුව, 1.5 × 106 cysts/mouse ගවේජ් හරහා එන්නත් කරන ලදී.නල හරහා G. duodenalis cyst හඳුන්වා දීමෙන් පසු එක් එක් මූසිකයේ සිරුරේ බර නිරීක්ෂණය කරන ලදී.පරපෝෂිත බර මැනීම සහ HE පැල්ලම් විශ්ලේෂණය සඳහා නැවුම් duodenum එකතු කරන ලදී.
කලින් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද ක්‍රියා පටිපාටියකට අනුව හිස්ටෝපාතික වෙනස්කම් විශ්ලේෂණය කරන ලදී [30].නැවුම් duodenum පටක සෛල සවිකිරීමකින් සවි කර, පැරෆින් වල තැන්පත් කර, 4 μm කොටස් වලට කපා, H&E වලින් පැල්ලම් කර සැහැල්ලු අන්වීක්ෂයක් යටතේ විශ්ලේෂණය කරන ලදී.ස්වාධීන මීයන් හත් දෙනෙකුගෙන් පටක කොටස් හතක නියෝජිත ව්‍යාධිමය වෙනස්කම් ප්‍රතිකාරය ගැන නොදන්නා ව්‍යාධි විද්‍යා ologist යෙකු විසින් ඇගයීමට ලක් කරන ලද අතර ඒවා 200x විශාලනයකින් අල්ලා ගන්නා ලදී.කලින් විස්තර කර ඇති ක්‍රමවලට අනුකූලව විලි වල දිග සහ ගුප්ත වල ගැඹුර මනිනු ලැබේ.
vitro සහ in vivo ප්‍රතිඵල තුන් ගුණයකින් ලබා ගන්නා ලදී.GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) භාවිතයෙන් ප්‍රස්තාර ජනනය කරන ලදී.කණ්ඩායම් දෙකක් අතර වෙනස්කම් t-test මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලද අතර, ≥3 කණ්ඩායම් අතර වෙනස්කම් SPSS මෘදුකාංගය (22.0 අනුවාදය; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) භාවිතයෙන් විචල්‍යයේ ඒක-මාර්ග විශ්ලේෂණය (ANOVA) මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.Levene ගේ පරීක්ෂණය සහ Bonferroni's post hoc test (B) භාවිතයෙන් විචල්‍යයේ සමජාතීයතාවය සඳහා දත්ත විශ්ලේෂණය කරන ලදී.වැදගත්කම P<0.05, P<0.01, සහ P<0.001 (සැලකිය යුතු නොවේ [ns]) (P>0.05) ලෙස ප්‍රකාශ වේ.
Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) හි GEV ප්‍රෝටෝමික්ස් පිළිබඳ අපගේ පෙර විශ්ලේෂණය පෙන්නුම් කළේ ගිනි අවුලුවන සංඥා මාර්ග සක්‍රිය කිරීමේදී බොහෝ ඉලක්ක සම්බන්ධ විය හැකි බවයි [13].අපි පොරොන්දු වූ ඉලක්ක දෙකක් තෝරා ගත්තෙමු, ඇල්ෆා-2 සහ ඇල්ෆා-7.3 ජියර්ඩින්, මෙම අණු විස්තාරණය කර pcDNA3.1(+) යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන දෛශිකය සෑදීමට ඒවා භාවිතා කරන්න.අනුක්‍රමණය කිරීමෙන් පසුව, ප්‍රතිසංයෝජක pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ alpha-7.3 giardine ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ ප්‍රාථමික මවුස් peritoneal macrophages වෙත මාරු කරන ලද අතර, කැස්පේස්-1 p20 අත්සන් ප්‍රෝටීන් දැවිල්ල (සක්‍රීය කැස්පේස්-1 කොටස) හඳුනා ගන්නා ලදී. දැවිල්ල ඇති කළ හැකි ප්‍රධාන අණු පැහැදිලි කරන ලෙස.ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී ගියේ ඇල්ෆා-2 සහ ඇල්ෆා-7.3 ජියර්ඩින්වලට GEV හා සමාන p20 කැස්පේස්-1 ප්‍රකාශනය ඇති කළ හැකි බවයි.ප්‍රතිකාර නොකළ සෘණ පාලනය (PBS පමණි) සහ ප්ලාස්මිඩ් පාලන pcDNA3.1(+) (Figure 1) තුළ කැස්පේස්-1 සක්‍රිය කිරීම කෙරෙහි කිසිදු බලපෑමක් දක්නට නොලැබුණි.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ alpha-7.3 giardins මගින් p20 caspase-1 සක්‍රීය කිරීම මැනීම.ප්‍රතිසංයෝජක යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ alpha-7.3 giardines (එක් එක් මංතීරුවට ඉහලින්) ප්‍රාථමික මවුස් peritoneal macrophages වෙත මාරු කරන ලද අතර පැය 24 කට පසුව සංස්කෘතික සුපිරි නාශක අස්වනු නෙළන ලදී.අත්සන කැස්පේස්-1 p20 ගිනි අවුලුවන ප්‍රෝටීනයේ ප්‍රකාශන මට්ටම් මැනීමට බටහිර බ්ලොටින් භාවිතා කරන ලදී.PBS-පමණක් ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම (lane C) සහ pcDNA3.1(+) monotherapy group (pcDNA3.1 lane) සෘණ පාලනයක් ලෙස භාවිතා කරන ලද අතර GEV ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම ධනාත්මක පාලනයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.ප්‍රතිසංයෝජන ප්‍රෝටීනයේ ප්‍රකාශනය එක් එක් ප්‍රෝටීනය තුළ හිස්ටයිඩින් ටැගයක් හඳුනා ගැනීමෙන් තහවුරු කරන ලද අතර, අපේක්ෂිත ප්‍රෝටීන පටි ඇල්ෆා-2 ජියර්ඩින් (38.2 kDa) සහ ඇල්ෆා-7.3 ජියර්ඩින් (37.2 kDa) වේ.GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-රේඛීය දෛශිකය, SUP, supernatant
alpha-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine p20 caspase-1 ප්‍රකාශනය ප්‍රේරණය කරන්නේද යන්න සහ ධාරක NLRP3 ගිනි අවුලුවන ප්‍රතිචාරය සක්‍රිය කිරීමේදී කාර්යභාරයක් ඉටු කරයිද යන්න තීරණය කිරීමට, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine සහ pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 giardin ප්‍රතිසංයෝජක ප්ලාස්මිඩ් DNA සමඟ ප්‍රාථමික මූසික පෙරිටෝනියල් මැක්‍රෝෆේජ් වෙත මාරු කරන ලද අතර ප්‍රධාන ගිනි අවුලුවන ප්‍රෝටීන NLRP3 හි ප්‍රකාශන මට්ටම්, ප්‍රාදේශීයකරණය සහ ඔලිගොමරීකරණය තීරණය කරන ලදී.මෙම අත්හදා බැලීමේදී, GEV ධනාත්මක පාලන කණ්ඩායම ලෙස භාවිතා කරන ලද අතර, කිසිදු ප්‍රතිකාර කණ්ඩායමක් (PBS පමණි) හෝ pcDNA3.1(+) මාරු කිරීමේ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම සෘණ කණ්ඩායම විය.GEV කාණ්ඩයේ මෙන්, giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 සහ giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 හි ප්‍රතිසංයෝජක ප්ලාස්මිඩ් DNA NLRP3, pro-IL-1β සහ නියාමනය කිරීමට හේතු වූ බව ප්‍රතිඵල පෙන්වා දුන්නේය. procaspase-1 සහ caspase-1 සක්රිය කිරීම (රූපය 2a).මීට අමතරව, giardines දෙකම සැලකිය යුතු IL-1β ස්‍රාවයක් ඇති කළේය (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.00 );alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (රූපය 2b).බොහෝ ASC ප්‍රෝටීන pcDNA3.1(+)-alpha-2 හෝ pcDNA3.1(+)-alpha- ට ප්‍රතිවිරුද්ධව pcDNA3.1(+) ප්ලාස්මිඩ් සමඟ මාරු කරන ලද ප්‍රතිකාර කන්ඩායමේ හෝ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායමෙහි ඒකමතික විය. 7.3 ජියර්ඩින්.ASC oligomerization සිදු වූයේ GEV ධනාත්මක පාලන කාණ්ඩයේ හෝ කාණ්ඩයේ ප්‍රතිසංයෝජක ප්ලාස්මිඩ් DNA තුළ, ඔලිගොමරික් ස්වරූපයක් පෙන්වයි (රූපය 2c).මෙම මූලික දත්ත වලට අනුව alpha-2 giardine සහ alpha-7,3 giardine NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රිය කිරීමට හේතු විය හැක.ASC සහ NLRP3 ප්‍රාදේශීයකරණය පිළිබඳ පසුකාලීන ප්‍රතිශක්තිකරණ අධ්‍යයනයන් පෙන්නුම් කළේ සෘණ පාලන කණ්ඩායම තුළ ASC ප්‍රෝටීනය සයිටොප්ලාස්මය පුරා විසිරී ඇති අතර giardine හෝ pcDNA3 සමඟ pcDNA3.1(+)-alpha-2 උත්තේජනය කිරීම මත තිත් සංඥාවක් ලෙස දිස්වන බවයි.1(+)-alpha-7,3 giardine කණ්ඩායම හෝ GEV ධනාත්මක පාලන කණ්ඩායම (රූපය 2d).සෘණ පාලනය සහ ප්ලාස්මිඩ්-ප්‍රතිකාර කළ pcDNA 3.1 කාණ්ඩවල, NLRP3 ප්‍රෝටීන් සංඥාව අනාවරණය නොවු අතර, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine හෝ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ට ප්‍රතිචාර වශයෙන් ප්‍රතිදීප්ත සංඥා තිතක්. අනාවරණය විය..giardine සයිටොප්ලාස්මයේ හෝ HEV උත්තේජනය මත දක්නට ලැබේ (රූපය 2e).මෙම දත්ත තවදුරටත් පෙන්නුම් කරන්නේ G. duodenalis giardin alpha-2 සහ giardin alpha-7.3 මවුස් ප්‍රාථමික පෙරිටෝනියල් මැක්‍රෝෆේජ්වල NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රීය කරන බවයි.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin මූසික peritoneal macrophages තුළ NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රීය කරයි.ප්‍රතිසංයෝජක යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ප්‍රාථමික මුරීන් peritoneal macrophages සහ සෛල වෙත මාරු කරන්න, නැතහොත් ප්‍රකාශනය, oligomerization විශ්ලේෂණය සඳහා පැය 24ක් ඇතුළත supernatant අස්වැන්න , ස්රාවය.සහ ප්රධාන ගිනි අවුලුවන ප්රෝටීන දේශීයකරණය.PBS-only (C) කණ්ඩායම සහ pcDNA3.1(+) තනි ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම ඍණ පාලනය ලෙස භාවිතා කරන ලද අතර GEV ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම ධනාත්මක කණ්ඩායම ලෙස භාවිතා කරන ලදී.NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1 සහ p20 caspase-1 ඇතුළු ප්‍රධාන ගිනි අවුලුවන ප්‍රෝටීන NLRP3 බටහිර බ්ලොටින් මගින් අනාවරණය කර ගන්නා ලදී.b supernatants වල IL-1β ස්‍රාවය කිරීමේ මට්ටම් තීරණය කරනු ලැබුවේ එන්සයිම සම්බන්ධිත ප්‍රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය (ELISA) භාවිතා කරමිනි.පාලන සහ පර්යේෂණාත්මක කණ්ඩායම් අතර වෙනස්කම් SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 භාවිතා කරමින් විචලනය පිළිබඳ එක්-මාර්ග විශ්ලේෂණය (ANOVA) මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු මගින් **P<0.01 සහ ***P<0.001 කණ්ඩායම් අතර සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.c පෙති වල ASC oligomerization මට්ටම් DSS හරස් සම්බන්ධක විශ්ලේෂණය මගින් තීරණය කරන ලද අතර සෛල ලයිසේට් වල ASC මට්ටම් පැටවීමේ පාලනයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.d immunofluorescence භාවිතා කරමින් ISC ස්ථානගත කිරීම දෘශ්‍යකරණය කිරීම.e Immunofluorescence NLRP3 හි ප්‍රාදේශීයකරණය දෘශ්‍යමාන කිරීමට භාවිතා කරන ලදී.ASC, ඇපොප්ටෝටික් ස්පෙකියුලම් වැනි ප්‍රෝටීන්;IL, ඉන්ටර්ලියුකින්;NLRP3, නියුක්ලියෝටයිඩ-බන්ධන ඔලිගොමරීකරණය වැනි ප්‍රතිග්‍රාහක 3;ns, සැලකිය යුතු නොවේ (P > 0.05)
G. duodenalis සහ එය ස්‍රාවය කරන GEVs යන දෙකම NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රීය කරන අතර vitro හි ධාරක ප්‍රදාහ ප්‍රතිචාර නියාමනය කරයි.මේ අනුව, G. duodenalis හි ව්‍යාධිජනකතාවයේ NLRP3 ගිනි අවුලුවන කාර්යභාරය අපැහැදිලි වේ.මෙම ගැටළුව විමර්ශනය කිරීම සඳහා, අපි G. duodenalis cyst ආසාදිත මීයන් සහ G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor ප්‍රතිකාරයෙන් ආසාදිත මීයන් අතර පරීක්ෂණයක් සැලසුම් කළ අතර G. duodenalis cyst ආසාදනය වූ විට NLRP3 ගිනි අවුලුවන ප්‍රකාශනය සංසන්දනය කළෙමු.අත්හදා බැලීමේ සවිස්තරාත්මක යෝජනා ක්රමයක් රූපය 3a හි දැක්වේ.විවිධ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම්වල මීයන්ගේ ශරීරයේ බරෙහි වෙනස්වීම් cysts ආසාදනය වීමෙන් පසු දින 7 ක් නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර එහි ප්‍රතිඵලය Fig. 3b හි දැක්වේ.පිරිසිදු PBS සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද කණ්ඩායමට සාපේක්ෂව, ප්රතිඵල පෙන්නුම් කළේ (i) G. duodenalis cyst ආසාදනය වූ මීයන්ගේ සිරුරේ බර ආසාදනය වීමෙන් පසු 3 වන දින සිට 7 වන දින දක්වා අඩු වී ඇති බවයි;(ii) MCC950 නිෂේධකය සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීම මීයන්ගේ ශරීර බරට සැලකිය යුතු බලපෑමක් නැත..තනි ආසාදන කණ්ඩායමට සාපේක්ෂව, MCC950 සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද duodenal ආසාදන කාණ්ඩයේ BW විවිධ මට්ටම් දක්වා අඩු විය (දින 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; දිනය 2: ANOVA, F( 3, 24 ) = 0.4602, P<0.0001; දින 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; දින 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; දිනය 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).මෙම දත්ත පෙන්නුම් කරන්නේ NLRP3 ආසාධනය මගින් duodenal ආසාදනයේ මුල් අවධියේදී (දින 2-4) සැලකිය යුතු බර අඩු වීමෙන් මීයන් ආරක්ෂා කරන බවයි.ඉන්පසුව අපි duodenal lavage තරලයේ G. duodenalis trophozoites හඳුනාගැනීම ඉලක්ක කරගත් අතර එහි ප්‍රතිඵල රූප සටහන 3c හි දැක්වේ.G. duodenalis cyst ආසාදන කණ්ඩායමට සාපේක්ෂව, NLRP3 ආසාධනය (t(12) = 2.902, P = 0.0133) අවහිර කිරීමෙන් පසු duodenum හි trophozoites සංඛ්යාව සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය.PBS සහ MCC950 සමඟ පමණක් ප්‍රතිකාර කරන ලද සෘණ පාලනයට සාපේක්ෂව HE සමඟ පැල්ලම් ඇති Duodenal පටක පෙන්නුම් කළේ: (i) G. duodenalis cyst ආසාදනය හේතුවෙන් duodenal villi (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) සහ crypt atrophy (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) G. duodenalis cyst ආසාදිත මීයන්ගේ duodenum සහ MCC950 inhibitors සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීම.duodenal villi හානි වී මිය ගොස් ඇත (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) atrophy සහ crypt ශාඛා සමග (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (රූපය 3d- f) .මෙම ප්රතිඵල යෝජනා කරන්නේ G. duodenalis හි ව්යාධිජනක බව අඩු කිරීම සඳහා NLRP3 ආසාධනය භූමිකාවක් ඉටු කරන බවයි.
Giardia duodenum ආසාදනයේදී NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව.මීයන් duodenococcal cyst සමඟ (iv) ඉවත් කර MCC950 (ip) සමඟ හෝ නැතිව ප්‍රතිකාර කරන ලදී.PBS හෝ MCC950 සහිත තනි ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම් පාලන ලෙස භාවිතා කරන ලදී.පර්යේෂණාත්මක කණ්ඩායම සහ ප්රතිකාර ක්රමය.b විවිධ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම්වල මීයන්ගේ ශරීර බර දින 7 ක් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.G. duodenalis ආසාදන කණ්ඩායම සහ G. duodenalis + MCC950 ආසාදන ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම අතර වෙනස SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 භාවිතයෙන් t-test මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු *P<0.05, **P<0.01, හෝ ***P<0.001 හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.c පරපෝෂිත භාරය තීරණය කරනු ලැබුවේ duodenal lavage තරලයේ ඇති trophozoites ගණන ගණනය කිරීමෙනි.G. duodenalis ආසාදන කණ්ඩායම සහ G. duodenalis + MCC950 ආසාදන ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම අතර වෙනස SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 භාවිතයෙන් t-test මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු *P <0.05 හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.d Hematoxylin සහ eosin (H&E) duodenal histopathology හි පැල්ලම් කිරීමේ ප්රතිඵල.රතු ඊතල මගින් විලී වලට වන හානිය පෙන්නුම් කරයි, හරිත ඊතල මගින් ගුප්ත කේතු වලට හානි වේ.පරිමාණ තීරුව: 100 µm.e, f duodenal villus උස සහ මූසික ගුප්ත උස පිළිබඳ සංඛ්‍යානමය විශ්ලේෂණය.තරු ලකුණු *P<0.05 සහ **P<0.01 හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.ප්රතිඵල ස්වාධීන ජීව විද්යාත්මක පරීක්ෂණ 7 කින් ලබාගෙන ඇත.BW, ශරීර බර;ig, intragastric බෙදාහැරීමේ මාර්ගය;ip, intraperitoneal බෙදාහැරීමේ මාර්ගය;ns, සැලකිය යුතු නොවේ (P > 0.05);PBS, පොස්පේට් බෆරඩ් සේලයින්;WT, වල් වර්ගය
IL-1β හි ස්‍රාවය දැවිල්ල සක්‍රීය කිරීමේ ලක්ෂණයකි.G. duodenalis alpha-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine vivo හි NLRP3 සත්කාරක දැවිල්ල සක්‍රීය කරන්නේද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා, අපි ප්‍රතිකාර නොකළ WT මීයන් (Sham group) සහ NLRP3 ගිනි අවුලුවන-අවහිර කළ මීයන් (MCC950 නිෂේධනය කළ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම) භාවිතා කළෙමු.අත්හදා බැලීමේ සවිස්තරාත්මක යෝජනා ක්රමයක් රූපය 4a හි දැක්වේ.පර්යේෂණාත්මක කණ්ඩායම් සමන්විත වූයේ පීබීඑස්, G. duodenalis cyst සමඟ ගැවේජ් මගින් ප්‍රතිකාර කළ මීයන්, pcDNA3.1 අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් කිරීම සහ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine හෝ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් කිරීමෙනි.ප්‍රතිසංයෝජක ප්ලාස්මිඩයේ අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි පරිපාලනයෙන් පසු 7 වන දින, සෙරුමය එකතු කරන ලද අතර එක් එක් කාණ්ඩයේ IL-1β මට්ටම තීරණය කරන ලදී.රූප සටහන 4b හි පෙන්වා ඇති පරිදි, MOCK කාණ්ඩයේ: (i) PBS කාණ්ඩයට සාපේක්ෂව, pcDNA3.1 ප්‍රතිකාරය IL-1β ස්‍රාවය කෙරෙහි සැලකිය යුතු බලපෑමක් නැත (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), කෙසේ වෙතත්, IL-β ස්‍රාවය G. duodenalis cyst කාණ්ඩයේ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine සහ pcDNA3 හි සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ ගොස් ඇත.1- alpha-7.3 giardine හි අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් කිරීම සෙරුමය IL-1β මට්ටම් සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine ප්‍රේරිත IL -1β ස්‍රාවය ඉහළ මට්ටමක පවතී. .MCC950 ප්‍රතිකාර කණ්ඩායමේ සහ MOCK කාණ්ඩයේ එක් එක් කණ්ඩායම සමඟ සසඳන විට: (i) PBS පාලන කණ්ඩායමේ සහ pcDNA3.1 පාලන කණ්ඩායමේ IL-1β ස්‍රාවය මට්ටම් MCC950 නිෂේධකය අවහිර කිරීමෙන් පසු යම් ප්‍රමාණයකට අඩු විය, නමුත් වෙනස එසේ නොවීය. සැලකිය යුතු (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 අවහිර කිරීමෙන් පසුව., IL-1β ස්‍රාවය G. duodenalis cyst-ආසාදිත කණ්ඩායම, pcDNA3.1-alpha-2 giardine කාණ්ඩය සහ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine කාණ්ඩයේ (G. duodenalis: ANOVA, F(9) සැලකිය යුතු ලෙස අඩු විය. , 58) = 3.540 , P = 0.0120 ) = 3.540, P = 0.0164).මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ, alpha-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine vivo තුළ NLRP3 ප්‍රදාහය සක්‍රීය කිරීමට මැදිහත් වන බවයි.
pcDNA3.1(+)-giardines vivo තුළ NLRP3 ධාරක ප්‍රදාහය සක්‍රීය කරයි.මීයන්ට ප්‍රතිසංයෝජක යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine හෝ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine සමඟින් ප්‍රතිශක්තිකරණය ලබා දී පසුව MCC950 (ip; MCC950 කණ්ඩායම) හෝ (අව්‍යාජ කණ්ඩායම) සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලදී. )PBS හෝ pcDNA3.1(+) ප්ලාස්මිඩ් ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම සෘණ පාලනයක් ලෙසත්, G. duodenalis cyst ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම ධනාත්මක පාලනයක් ලෙසත් භාවිතා කරන ලදී.පර්යේෂණාත්මක කණ්ඩායම සහ ප්රතිකාර ක්රමය.b මීයන්ගේ IL-1β හි සෙරුමය මට්ටම 7 වන දින ELISA විශ්ලේෂණය මගින් මනිනු ලැබීය.MOCK කාණ්ඩයේ කණ්ඩායම් අතර ඇති වෙනස්කම් එක්-මාර්ග ANOVA භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලද අතර MOCK කණ්ඩායම සහ MCC950 කණ්ඩායම අතර ඇති වෙනස්කම් SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 හි t-test භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.MOCK කාණ්ඩයේ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම් අතර සැලකිය යුතු වෙනස්කම් තරු ලකුණු පෙන්නුම් කරයි, *P<0.05 සහ ***P<0.001;ඩොලර් සලකුණු ($) MOCK කාණ්ඩයේ එක් එක් කණ්ඩායම සහ P<0.05 හි MCC950 කාණ්ඩය අතර සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.ස්වාධීන ජීව විද්‍යාත්මක පරීක්ෂණ හතක ප්‍රතිඵල.i, මාංශ පේශි එන්නත් කිරීම, ns, සැලකිය යුතු නොවේ (P > 0.05)
G. duodenalis ආසාදනයට NLRP3 ධාරක ප්‍රදාහයේ ඇල්ෆා-2 සහ ඇල්ෆා-7.3 giardine-මැදිහත් සක්‍රිය කිරීමේ බලපෑම විමර්ශනය කිරීමට, අපි WT C57BL/6 මීයන් භාවිතා කර ඇල්ෆා-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine එන්නත් කළෙමු.G. duodenalis cyst හි ආමාශයික නාලය හරහා දින 3 කට පසු ප්ලාස්මිඩ් අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් කරන ලද අතර පසුව මීයන් දින 7 ක් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.අත්හදා බැලීමේ සවිස්තරාත්මක යෝජනා ක්රමය රූපය 5a හි දැක්වේ.සෑම මූසිකයකම ශරීර බර සෑම දිනකම මනිනු ලබන අතර, ආමාශයික නලයක් හරහා පරිපාලනය කිරීමෙන් පසු 7 වන දින නැවුම් duodenal පටක සාම්පල එකතු කරන ලදී, ට්‍රොෆොසොයිට් ගණන මනිනු ලබන අතර හිස්ටෝපාතික වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.රූප සටහන 5b හි පෙන්වා ඇති පරිදි, ආහාර ගැනීමේ කාලය වැඩි වීමත් සමඟ, එක් එක් කාණ්ඩයේ මීයන්ගේ BW ක්‍රමයෙන් වැඩි විය.G. duodenalis cysts intragastric පරිපාලනයෙන් පසු 3 වන දින මීයන්ගේ MT අඩු වීමට පටන් ගත් අතර පසුව ක්රමයෙන් වැඩි විය.alpha-2 giardine සහ alpha7.3 giardine අභ්‍යන්තර මාංශ පේශි එන්නත් කිරීම මගින් ප්‍රේරණය කරන ලද NLRP3 ප්‍රදාහය සක්‍රීය කිරීම මීයන්ගේ බර අඩු වීම සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කළේය (දින 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 39) = 1. = 0 .9754 දිනය 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 Day 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; දින 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409: pcDNA3.1-alpha-2 giardine (ANOVA, 4 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, දින 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, දින 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Day 6: pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Day 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;දිනය 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Day 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001).පරපෝෂිත භාරය duodenum තුළ තක්සේරු කර ඇත (රූපය 5c).ප්‍රතිකාර නොකළ ධනාත්මක පාලනය සහ හිස් pcDNA3.1 දෛශිකය සමඟ එන්නත් කරන ලද කණ්ඩායම සමඟ සසඳන විට, α-2 giardine සහ α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha-alpha) සමඟ එන්නත් කරන ලද කණ්ඩායම්වල G. duodenalis trophozoites ගණන සැලකිය යුතු ලෙස අඩු විය. -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).මීට අමතරව, giardine alfa-7.3 giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ට වඩා මීයන් තුළ ආරක්ෂිත විය.HE staining ප්රතිඵල fig පෙන්වා ඇත.5d-f.G. duodenalis එන්නත් කරන ලද මීයන් සහ හිස් pcDNA3 දෛශිකයක් සමඟ ඒකාබද්ධව G. duodenalis එන්නත් කළ මීයන් හා සසඳන විට, ඇල්ෆා-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine සමඟ එන්නත් කරන ලද මීයන්ගේ duodenal පටක තුවාල අඩු විය.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 හෝ P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 හෝ P = 0.0055) සහ අඩු කරන ලද ගුප්ත atrophy (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 හෝ P = 0.0158; pcDNA3.3.1-alphaard-7.NO. , F (3, 24) = 1.470, P = 0.0371 හෝ P = 0.0191).මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ, alpha-2 giardine සහ alpha-7,3 giardine, vivo තුළ NLRP3 inflammasome සක්‍රිය කිරීමෙන් G. duodenalis හි ආසාදනය අඩු කරන බවයි.
G. duodenalis ආසාදනයේ pcDNA3.1(+)-giardins වල කාර්යභාරය.මීයන්ට ප්‍රතිශක්තිකරණ යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන ප්ලාස්මිඩ් pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine හෝ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine සමඟ ප්‍රතිශක්තිකරණ (IM) ලබා දී පසුව G. duodenalis cysts (ig) සමඟ අභියෝග කරන ලදී.PBS කණ්ඩායම සහ pcDNA3.1 (+) + duodenal cyst ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම සෘණ පාලන කණ්ඩායම් ලෙස භාවිතා කරන ලද අතර duodenal cyst ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම ධනාත්මක පාලන කණ්ඩායමක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.පර්යේෂණාත්මක කණ්ඩායම සහ ප්රතිකාර ක්රමය.b විවිධ ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම්වල මීයන්ගේ MT ප්‍රමාණය දින 7 ක් පශ්චාත් අභියෝගයෙන් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු G. duodenalis කාණ්ඩයේ සහ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine කාණ්ඩයේ කණ්ඩායම් අතර සැලකිය යුතු වෙනස්කම් පෙන්නුම් කරයි, *P <0.05, **P <0.01, සහ ***P <0.001;ඩොලර් ලකුණ ($) G. duodenalis හි එක් එක් කණ්ඩායම සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine කාණ්ඩය, $$P<0.01 සහ $$$P<0.001 අතර සැලකිය යුතු වෙනසක් පෙන්නුම් කරයි.c පරපෝෂිත භාරය duodenum (සෙන්ටිමීටර 3 ක් දිග) සිට duodenal lavage මිලි ලීටර් 1 ක trophozoites සංඛ්යාව ගණනය කිරීම මගින් තීරණය කරන ලද අතර duodenum හි සෙ.මී. එකකට පරපෝෂිතයන් සංඛ්යාව ලෙස ප්රකාශිතය.G. duodenalis ආසාදන කණ්ඩායම, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine කාණ්ඩය සහ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine කාණ්ඩය අතර වෙනස්කම් SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 භාවිතා කරමින් එක්-මාර්ග ANOVA මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු **P<0.01 සහ ***P<0.001 හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.d duodenum හි histopathological වෙනස්කම්.රතු ඊතල මගින් විලී වලට වන හානිය පෙන්නුම් කරයි, හරිත ඊතල මගින් ගුප්ත කේතු වලට හානි වේ.පරිමාණ තීරුව: 100 µm.e, f මූසික duodenal villus උස (e) සහ crypt උස (f) පිළිබඳ සංඛ්‍යානමය විශ්ලේෂණය.රූප සටහන 1d හි කණ්ඩායම් අතර වෙනස්කම් SPSS මෘදුකාංග අනුවාදය 22.0 භාවිතා කරමින් එක්-මාර්ග ANOVA මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී.තරු ලකුණු *P<0.05 සහ **P<0.01 හි සැලකිය යුතු වෙනස්කම් දක්වයි.ස්වාධීන ජීව විද්‍යාත්මක පරීක්ෂණ හතක ප්‍රතිඵල.ns, සැලකිය යුතු නොවේ (P > 0.05)
Giardia duodenum යනු මිනිසුන්ගේ සහ අනෙකුත් ක්ෂීරපායීන්ගේ ජියර්ඩියාසිස් ඇති කරන සුප්‍රසිද්ධ බඩවැල් පරපෝෂිතයෙකි.2004 දී, එය වසර 6 ක් පුරා, විශේෂයෙන් අඩු සමාජ ආර්ථික තත්ත්වයක ප්‍රජාවන් තුළ එහි ඉහළ ව්‍යාප්තිය හේතුවෙන් WHO නොසලකා හරින ලද රෝග මුලපිරුමට ඇතුළත් කරන ලදී [32].G. duodenalis ආසාදනයට ප්‍රතිශක්තිකරණ ප්‍රතිචාරයේ සහජ ප්‍රතිශක්තිකරණ පද්ධතිය තීරණාත්මක කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි.මූසික මැක්‍රෝෆේජ් බාහිර සෛලීය උගුල් මුදා හැරීමෙන් G. duodenalis ගිල දමා මරා දමන බවට වාර්තා වී ඇත [33].අපගේ පෙර අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ ආක්‍රමණශීලී නොවන බාහිර සෛලීය පරපෝෂිතයෙකු වන G. duodenalis, ධාරක ප්‍රදාහ ප්‍රතිචාර නියාමනය කිරීම සඳහා මවුස් මැක්‍රෝෆේජ් තුළ p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, සහ NLRP3 ගිනි අවුලුවන සංඥා මාර්ග සක්‍රිය කරන අතර GEV මඟින් මෙම ක්‍රියාවලිය වැඩිදියුණු කළ හැකි බවයි.13], 24].කෙසේ වෙතත්, GEV හි NLRP3 ගිනි අවුලුවන-නියාමනය කරන ලද ප්‍රදාහයට සම්බන්ධ නිශ්චිත PAMPs සහ giardiasis හි NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව පැහැදිලි කිරීමට ඉතිරිව ඇත.මෙම ප්‍රශ්න දෙක පිළිබඳව ආලෝකයක් ලබා දීම සඳහා අපි මෙම අධ්‍යයනය සිදු කළෙමු.
NLRP3 ප්‍රදාහකය ප්‍රතිශක්තිකරණ සෛලවල සයිටොප්ලාස්මයේ පිහිටා ඇති අතර යූරික් අම්ල ස්ඵටික, විෂ, බැක්ටීරියා, වෛරස් සහ පරපෝෂිතයන් වැනි විවිධ අංශු මගින් සක්‍රිය කළ හැක.බැක්ටීරියා අධ්‍යයනයේ දී, ප්‍රදාහ සංවේදක සක්‍රීය කරන ප්‍රධාන PAMPs ලෙස විෂ ද්‍රව්‍ය හඳුනාගෙන ඇති අතර, එය දැවිල්ල හා සෛල මරණයට හේතු වේ [34].Staphylococcus aureus වෙතින් hemolysin [35] සහ Escherichia coli [36], enterotoxin (NHE) [37] වෙතින් hemolysin BL (HBL) වැනි ව්‍යුහාත්මකව විවිධ විෂ ද්‍රව්‍ය NLRP3 ප්‍රදාහය සක්‍රීය කිරීමට පොළඹවයි.වෛරස් අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ SARS-COV-2 ලියුම් කවර (E) ප්‍රෝටීන් [38] සහ Zika වෛරස් NS5 ප්‍රෝටීන් [39] වැනි වෛරස් ප්‍රෝටීන NLRP3 ප්‍රතිග්‍රාහකය විසින් හඳුනාගෙන ඇති වැදගත් PAMPs බවයි.පරපෝෂිත අධ්‍යයනයන්හිදී, බොහෝ පරපෝෂිතයන් Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], සහ Leishmania [42] වැනි ධාරක ගිනි අවුලුවන ක්‍රියාකාරීත්වය සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති බව වාර්තා වී ඇත.ලුවිස් මී මැක්‍රෝෆේජ් වල පයිරොප්ටෝසිස් ප්‍රේරණය කිරීම සඳහා ටොක්සොප්ලාස්මා ගොන්ඩි වල වයිරසය හා සම්බන්ධ ඝන කැටිති ප්‍රෝටීන් GRA35, GRA42 සහ GRA43 අවශ්‍ය වේ [43].මීට අමතරව, සමහර Leishmania අධ්‍යයනයන් NLRP3 ගිනි අවුලුවන පරපෝෂිත පටල lipophosphoglycan [44] හෝ සින්ක් metalloprotease [45] වැනි තනි අණු කෙරෙහි අවධානය යොමු කර ඇත.ඇනෙක්සින්-සමාන ඇල්ෆා-ගියාර්ඩින් පරම්පරාවේ ජාන අතර, ඇල්ෆා-1 ජියාර්ඩින් මූසික ආකෘතියක G. duodenalis ට එරෙහිව ආරක්ෂාව සපයන විභව එන්නත් අපේක්ෂකයෙකු බව පෙන්වා දී ඇත [18].අපගේ අධ්‍යයනයේ දී, අපි G. duodenalis වෛරස් සාධක ඇල්ෆා-2 සහ ඇල්ෆා-7,3 giardines තෝරා ගත්තෙමු, ඒවා giardia සඳහා අනන්‍ය වූ නමුත් සාපේක්ෂව අඩුවෙන් වාර්තා වේ.මෙම ඉලක්ක ජාන දෙක pcDNA3.1(+) යුකැරියෝටික් ප්‍රකාශන පද්ධති දෛශිකය තුළට ක්ලෝන කරන ලද්දේ දැවිල්ල සක්‍රීය කිරීම විශ්ලේෂණය කිරීම සඳහාය.
අපගේ මූසිකයේ ආකෘතියේ, කැස්පේස් කැස්පේස් කොටස් ගිනි අවුලුවන ක්‍රියාකාරීත්වයේ සලකුණු ලෙස සේවය කරයි.උත්තේජනය මත, NLRP3 ASC සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරයි, ප්‍රොකාස්පේස් බඳවා ගනී, සහ ක්‍රියාකාරී කැස්පේස් උත්පාදනය කරයි, එය pro-IL-1β සහ pro-IL-18 පරිණත IL-1β සහ IL-18, පිළිවෙලින් -18 බවට පත් කරයි.ගිනි අවුලුවන කැස්පේස් (කැස්පේස්-1, -4, -5 සහ -11) යනු සහජ ආරක්‍ෂාව සඳහා තීරණාත්මක වන අතර දැවිල්ලට සහ වැඩසටහන්ගත සෛල මියයාමට සම්බන්ධ වන සිස්ටීන් ප්‍රෝටීස්වල සංරක්‍ෂිත පවුලකි [46].කැස්පේස්-1 කැනොනිකල් ගිනි අවුලුවන [47] මගින් සක්‍රීය වන අතර, කැස්පේස්-4, -5, සහ -11 අසාමාන්‍ය ගිනි අවුලුවන [48] සෑදීමේදී කැඩී යයි.මෙම අධ්‍යයනයේ දී, අපි Mouse peritoneal macrophages ආකෘතියක් ලෙස භාවිතා කළ අතර G. duodenalis ආසාදනය පිළිබඳ අධ්‍යයනයන්හි සත්කාරක NLRP3 දැවිල්ල සක්‍රීය කිරීමේ සලකුණක් ලෙස p20 කැස්පේස්-1 ක්ලීව්ඩ් කැස්පේස්-1 විමර්ශනය කළෙමු.ප්‍රතිඵල පෙන්නුම් කළේ බැක්ටීරියා සහ වෛරස් වලට සම්බන්ධ ප්‍රධාන වෛරස් අණු සොයා ගැනීම සමඟ අනුකූල වන දැවිල්ල සාමාන්‍ය සක්‍රීය කිරීම සඳහා බොහෝ ඇල්ෆා-ගියර්ඩින් වගකිව යුතු බවයි.කෙසේ වෙතත්, අපගේ අධ්‍යයනය ප්‍රාථමික තිරයක් පමණක් වන අතර, අපගේ පෙර අධ්‍යයනයෙන් G. duodenalis ආසාදනය තුළ සම්භාව්‍ය සහ සම්භාව්‍ය නොවන දැවිල්ල ඇති බව සොයා ගත් බැවින්, සම්භාව්‍ය නොවන දැවිල්ල සක්‍රිය කළ හැකි වෙනත් අණු තිබේ [13].උත්පාදනය කරන ලද p20 කැස්පේස්-1 NLRP3 ආසාධනය සමඟ සම්බන්ධ වේද යන්න තවදුරටත් තීරණය කිරීම සඳහා, අපි ප්‍රධාන අණු ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශන මට්ටම් සහ ASC oligomerization මට්ටම් තීරණය කිරීම සඳහා alpha-2 සහ alpha-7.3 giardins mouse peritoneal macrophages වෙත මාරු කළෙමු. ගිනි අවුලුවන NLRP3.අපගේ ප්‍රතිඵල Manko-Prykhoda et al ගේ ප්‍රතිඵලවලට වඩා තරමක් වෙනස් ය., G. muris හෝ E. coli EPEC වික්‍රියා සමඟ පමණක් Caco-2 සෛල උත්තේජනය කිරීමෙන් NLRP3, ASC සහ caspase-1 හි ප්‍රතිදීප්ත තීව්‍රතාවය වැඩි කළ හැකි බව වාර්තා කළේය. සැලකිය යුතු ලෙස නොවුනත්, G. muris සහ E. coli හි කොස්ටිමියුලේෂන් ප්‍රෝටීන තුනක මට්ටම් වැඩි කළ ආකාරය [49].මෙම විෂමතාවය Giardia විශේෂ, සෛල රේඛා සහ ප්‍රාථමික සෛල තෝරාගැනීමේ වෙනස්කම් නිසා විය හැක.G. duodenalis වලට වැඩි අවදානමක් ඇති සති 5ක් වයසැති WT C57BL/6 මීයන් තුළ MCC950 භාවිතයෙන් vivo assays වලදීද අපි සිදු කළෙමු.MCC950 යනු නැනෝමෝලර් සාන්ද්‍රණයේදී කැනොනිකල් සහ කැනොනිකල් නොවන NLRP3 සක්‍රිය කිරීම අවහිර කරන ප්‍රබල සහ තෝරාගත් කුඩා අණු NLRP3 නිෂේධනයකි.MCC950 NLRP3 සක්‍රිය කිරීම වළක්වන නමුත් AIM2, NLRC4 සහ NLRP1 ගිනි අවුලුවන මාර්ග හෝ TLR සංඥා මාර්ග [27] සක්‍රිය කිරීමට බලපාන්නේ නැත.MCC950 NLRP3 සක්‍රිය කිරීම අවහිර කරන නමුත් NLRP3 ආරම්භය, K+ ප්‍රවාහය, Ca2+ ගලා ඒම හෝ NLRP3 සහ ASC අතර අන්තර්ක්‍රියා වළක්වන්නේ නැත;ඒ වෙනුවට, එය ASC oligomerization [27] අවහිර කිරීමෙන් NLRP3 ගිනි අවුලුවන සක්‍රිය කිරීම වළක්වයි.එබැවින්, අපි ජියර්ඩින් එන්නත් කිරීමෙන් පසු NLRP3 ගිනි අවුලුවන භූමිකාව තීරණය කිරීම සඳහා in vivo අධ්‍යයනයකදී MCC950 භාවිතා කළෙමු.සක්‍රිය කැස්පේස්-1 p10 ප්‍රෝ-ගිනි අවුලුවන සයිටොකයින් pro-IL-1β සහ pro-IL-18 පරිණත IL-1β සහ IL-18 බවට පත් කරයි [50].මෙම අධ්‍යයනයේ දී, MCC950 සමඟ හෝ රහිතව giardine-ප්‍රතිකාර කළ මීයන්ගේ සෙරුමය IL-1β මට්ටම් NLRP3 ප්‍රදාහය සක්‍රීය වී තිබේද යන්න පිළිබඳ දර්ශකයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.අපේක්ෂා කළ පරිදි, MCC950 ප්‍රතිකාරය සෙරුමය IL-1β මට්ටම් සැලකිය යුතු ලෙස අඩු කළේය.G. duodenalis giardin alfa-2 සහ giardin alfa-7.3 NLRP3 mouse inflammasome සක්‍රීය කිරීමට සමත් බව මෙම දත්ත පැහැදිලිව පෙන්නුම් කරයි.
IL-17A යනු G. muris ට එරෙහිව ප්‍රතිශක්තිකරණයේ ප්‍රධාන නියාමකය, IL-17RA සංඥා ප්‍රේරණය කිරීම, ප්‍රතික්ෂුද්‍ර ජීවී පෙප්ටයිඩ නිපදවීම සහ අනුපූරක සක්‍රීය කිරීම නියාමනය කිරීම බව පසුගිය දශකය තුළ රැස්කරගත් සැලකිය යුතු දත්ත පෙන්නුම් කරයි [51].කෙසේ වෙතත්, Giardia ආසාදනය තරුණ වැඩිහිටියන් තුළ බහුලව දක්නට ලැබෙන අතර, තරුණ මීයන්ගේ Giardia ආසාදනය එහි ආරක්ෂිත බලපෑම [52] යෙදීම සඳහා IL-17A ප්‍රතිචාරය සක්‍රීය නොකරන බව වාර්තා වී ඇති අතර, වෙනත් ප්‍රතිශක්තිකරණ Giardia සොයා බැලීමට පර්යේෂකයන් පොළඹවයි.හෙල්මින්ත් ආසාදන යාන්ත්රණ.මෑත අධ්‍යයනයක කතුවරුන් වාර්තා කළේ G. muris හට E. coli EPEC මගින් NLRP3 ප්‍රදාහය සක්‍රීය කළ හැකි බවත්, එය ක්ෂුද්‍ර ජීවී නාශක පෙප්ටයිඩ නිෂ්පාදනය ප්‍රවර්ධනය කරන බවත්, එහි ඇමුණුම් ධාරිතාව සහ බඩවැල්වල ඇති ට්‍රොෆොසොයිට් සංඛ්‍යාව අඩු කරන බවත්, එමගින් බඩවැලේ බරපතලකම අඩු කරන බවත්ය. බැසිලි නිසා ඇතිවන රෝග [49].NLRP3 දැවිල්ල විවිධ රෝග වර්ධනයට සම්බන්ධ වේ.අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ Pseudomonas aeruginosa සෛල මිය යාම වළක්වා ගැනීම සඳහා මැක්‍රෝෆේජ් තුළ ස්වයංක්‍රීයකරණය ප්‍රේරණය කරන අතර මෙම ක්‍රියාවලිය NLRP3 ගිනි අවුලුවන [53] සක්‍රීය කිරීම මත රඳා පවතී.N. caninum සඳහා, NLRP3 ගිනි අවුලුවන වල ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ-මැදිහත් සක්‍රිය කිරීම ධාරකය තුළ එහි ප්‍රතිවර්තනය සීමා කරයි, එය විභව චිකිත්සක ඉලක්කයක් බවට පත් කරයි [9].Paracoccidioides brasiliensis මගින් මූසික ඇටමිදුළු වලින් ව්‍යුත්පන්න වූ ඩෙන්ඩ්‍රිටික් සෛල තුළ NLRP3 ආසාධනය සක්‍රීය කිරීම සඳහා පොළඹවන බව සොයාගෙන ඇති අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ධාරක ආරක්‍ෂාවෙහි තීරණාත්මක කාර්යභාරයක් ඉටු කරන ගිනි අවුලුවන සයිටොකයින් IL-1β මුදා හැරීම සිදු වේ [10].L. amazonensis, L. major, L. braziliensis සහ L. infantum chagasi ඇතුළු Leishmania විශේෂ කිහිපයක්, macrophages තුළ NLRP3 සහ ASC මත යැපෙන කැස්පේස්-1 මෙන්ම Leishmania ආසාදනය ද සක්‍රීය කරයි.NLRP3/ASC/caspase-1 ජානයේ [11] ඌනතාවයෙන් යුත් මීයන් තුළ පරපෝෂිත ප්‍රතිවර්තනය වැඩි දියුණු කර ඇත.සැම්බෝනි සහ අල්.ලීෂ්මේනියා ආසාදනය මැක්‍රෝෆේජ් තුළ NLRP3 ආසාධනය සක්‍රීය කිරීමට හේතු වන බව වාර්තා වී ඇති අතර එමඟින් අන්තර් සෛලීය පරපෝෂිත ප්‍රතිවර්තනය සීමා කරයි.මේ අනුව, Leishmania වැළැක්වීමේ උපාය මාර්ගයක් ලෙස NLRP3 සක්‍රීය කිරීම වළක්වයි.vivo අධ්‍යයනයන්හිදී, NLRP3 ආසාධනය ලීෂ්මේනියාව තුරන් කිරීමට දායක වූ නමුත් පටක වලට බල නොපායි [54].අනෙක් අතට, හෙල්මින්තියාසිස් අධ්‍යයනයන්හිදී, NLRP3 ආසාධනය සක්‍රීය කිරීම ආමාශ ආන්ත්‍රික හෙල්මින්තියාසිස් වලට එරෙහිව ධාරකයාගේ ආරක්ෂිත ප්‍රතිශක්තිය යටපත් කළේය [12].ෂිගෙල්ලා යනු ලොව පුරා පාචනය ඇති කරන ප්‍රධාන බැක්ටීරියාවකි.මෙම බැක්ටීරියා වලට P2X7 ප්‍රතිග්‍රාහක-මැදිහත් වූ K+ ප්‍රවාහය, ප්‍රතික්‍රියාශීලී ඔක්සිජන් විශේෂ, ලයිසොසෝමල් ආම්ලිකතාවය සහ මයිටොකොන්ඩ්‍රිය හානි හරහා IL-1β නිෂ්පාදනය ඇති කළ හැක.NLRP3 ප්‍රදාහකය ෂිගෙල්ලා [55] ට එරෙහිව macrophages වල phagocytosis සහ bactericidal ක්‍රියාකාරකම් සෘණාත්මකව නියාමනය කරයි.ප්ලාස්මෝඩියම් අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ ප්ලාස්මෝඩියම් ආසාදනය වූ AIM2, NLRP3 හෝ කැස්පේස්-1 ඌනතාවයෙන් යුත් මීයන් 1 වර්ගයේ ඉන්ටර්ෆෙරෝන් ඉහළ මට්ටම් නිපදවන අතර ප්ලාස්මෝඩියම් ආසාදනයට වඩා ප්‍රතිරෝධී වන බවයි [56].කෙසේ වෙතත්, මීයන් තුළ NLRP3 දැවිල්ල ව්යාධිජනක සක්රිය කිරීම සඳහා ඇල්ෆා-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine වල කාර්යභාරය අපැහැදිලි ය.
මෙම අධ්‍යයනයේ දී, MCC950 මගින් NLRP3 දැවිල්ල නිෂේධනය කිරීම BW අඩු කරන අතර මීයන්ගේ බඩවැල් සේදීමේ තරලයේ ට්‍රොෆොසොයිට් සංඛ්‍යාව වැඩි කිරීම, duodenal පටකවල වඩාත් දරුණු ව්යාධි වෙනස්කම් ඇති කරයි.Alpha-2 giardine සහ alpha-7.3 giardine ධාරක මූසිකය NLRP3 ගිනි අවුලුවන සක්‍රීය කරයි, මූසිකයේ සිරුරේ බර වැඩි කරයි, බඩවැල් සේදීමේ තරලයේ ඇති ට්‍රොෆොසොයිට් සංඛ්‍යාව අඩු කරයි, සහ ව්යාධිජනක duodenal තුවාල සමනය කරයි.මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ G. duodenalis හට NLRP3 ධාරක ප්‍රදාහකය alpha-2 giardine සහ alpha-7,3 giardine හරහා සක්‍රීය කර මීයන් තුළ G. duodenalis හි ව්‍යාධිජනක බව අඩු කරන බවයි.
සාමූහිකව, අපගේ ප්‍රතිඵල පෙන්නුම් කරන්නේ ඇල්ෆා-2 සහ ඇල්ෆා-7.3 ජියර්ඩීන් NLRP3 ධාරක ප්‍රදාහය සක්‍රීය කිරීමට සහ මීයන් තුළ G. duodenalis ආසාදනය අඩු කරන බවයි.එමනිසා, මෙම අණු giardiasis වැළැක්වීම සඳහා පොරොන්දු වූ ඉලක්ක වේ.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: දළ විශ්ලේෂණයක්.Pat Inflamm ඖෂධ වලට අසාත්මික බව මෑතකදී අනාවරණය විය.2019;13:134-43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: ඖෂධීය චිකිත්සාව පිළිබඳ සමාලෝචනයක්.ඖෂධවේදියෙකුගේ විශේෂඥ මතය.2007;8: 1885-902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, ඖෂධ ප්රතිරෝධය සහ නව ඉලක්ක සොයා ගැනීම.ආබාධ ඖෂධ ඉලක්ක ආසාදනය කරයි.2010;10:295-302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ආදිය NLRP3 ගිනි අවුලුවන සහ ගිනි අවුලුවන රෝග.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. ආන්ත්‍රික ප්‍රදාහය සහ පිළිකා වලදී ගිනි අවුලුවන භූමිකාව.ආමාශ ආන්ත්රයික විද්යාව.2011;141:1986-99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. ප්‍රතිශක්තිකරණ ඉවසීම සහ බඩවැලේ දැවිල්ල යන මංසන්ධියේදී කැනොනිකල් සහ අසාමාන්‍ය NLRP3 ගිනි අවුලුවන සක්‍රීය කිරීම.පූර්ව ප්රතිශක්තිකරණ.2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-මැදිහත් NLRP3 ගිනි අවුලුවන සක්‍රීය කිරීම N. Caninum ආසාදනයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් සම්බන්ධ වේ.පරපෝෂිත දෛශිකය.2020;13:449.